[发明专利]一种分泌表达PEDV核心抗原COE蛋白重组乳酸乳球菌及其制备方法和应用

摘要

本发明属于动物生物医药工程领域，具体公开了一种分泌表达PEDV核心抗原COE蛋白重组乳酸乳球菌及其制备方法和应用。本发明通过设计多条引物，采用重叠延伸PCR的方法将信号肽等序列连接到PEDV核心抗原COE的基因上，并将其连接到乳酸乳球菌表达载体pNZ8048，电转化入乳酸乳球菌NZ9000细胞内获得重组菌。将重组菌以乳链菌肽诱导获得表达，诱导后的全培养物直接作为口服疫苗能够刺激小鼠并引起较强的细胞免疫应答，该重组乳酸乳球菌可以作为一种具有良好产业前景的新型口服疫苗产品，对减轻PEDV对养猪业的危害起到积极的作用，对促进养猪业健康发展具有重要的实践意义。

主权项

一种分泌表达猪流行性腹泻病毒核心抗原COE蛋白重组乳酸乳球菌的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1. 人工合成经密码子优化后的COE基因，设计多条引物，采用重叠延伸PCR的方法将Usp45信号肽序列连接到COE基因上；S2. 将S1获得的COE基因连接至pNZ8048并筛选得到重组质粒pNZ8048‑COE；采用电转化法将pNZ8048‑COE重组质粒导入乳酸乳球菌L.lactisNZ9000中，获得重组乳酸乳球菌L.lactisNZ9000/pNZ8048‑COE；S1所述经密码子优化后的COE基因序列如SEQ IDNO：1所示，各引物序列如SEQ ID NO：2～9所示；所述筛选重组质粒的引物序列如SEQ ID NO：10～11所示。