[发明专利]一种免疫复合物吸附细胞的制作方法

摘要

本发明公开了一种免疫复合物吸附细胞的制作方法，步骤包括载体构建、病毒包装制作、永生化B淋巴细胞制作和基因转染，本发明制作出了一套分别携带有特定基因的永生化的细胞，具有永生化(无限增殖分裂能力)和表达某一种免疫复合物受体于细胞表面的能力，通过扩增培养的细胞，建立免疫复合物分析组合，一次可以对血液或者身体组织的各种免疫复合物进行识别、分类、定量。还具有低成本无限增殖、检测速度快，操作简单等特点。本发明的目的是为了得到永生化的B淋巴细胞，该B淋巴细胞是能稳定表达一种免疫复合物受体基因，并且该受体能在细胞膜上存在，并能结合细胞外的对应的一种免疫复合物，并不局限于永生化B细胞。

主权项

一种免疫复合物吸附细胞的制作方法，其特征在于，步骤包括载体构建、病毒包装制作、永生化B淋巴细胞制作和基因转染，所述载体构建的步骤为：(1.1)设计三个基因，分别是CR1、CR2和CD93；这三个基因是补体系统的膜上信号蛋白受体，且分别结合血液中的C3b、C3d和C1q补体蛋白，起到捕获作用；设计引物为：CR1上游引物序列：5’‑CTCGAGCGGAGCACAATGATTGGTCA‑3’CR1下游引物序列：5’‑CCTAGG TGGCTCCTTTCCCACCAAAA‑3’CR2上游引物序列：5’‑CTCGAGGGGTCTCGGAACGCATCC‑3’CR2下游引物序列：5’‑CCTAGGTCCAAGCAATGAGGCACACA‑3’CD93上游引物序列：5’‑CTCGAGGCCACACAGAGACCGGG‑3’CD93下游引物序列：5’‑CCTAGGTGTCTCTAGGGCCACCTCAC‑3’。(1.2)DNA提取为了克隆出全长的CR1、CR2和CD93序列，使用DNA抽屉试剂盒从海拉细胞中抽提出DNA，再以上述引物为模板，通过PCR反应分别克隆出三个基因的基因片段；(1.3)质粒构建和扩增、获取根据现代生物分子技术，通过酶切酶连技术，将pLVX‑IRES‑Neo从XhoI和BamHI酶切位点切开，再使用连接酶将之前获得的基因片段连接到pLVX‑IRES‑Neo中；将pLVX‑IRES‑Neo转入感受态菌株中，扩增培养，最后抽提感受态菌株的质粒；所述XhoI酶切位点序列为：CTCGAG；BamHI酶切位点序列为：GGATCC。