[发明专利]一种免疫复合物吸附细胞的制作方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种细胞制作的方法，具体是一种免疫复合物吸附细胞的制作方法。

背景技术

免疫复合物：抗体与抗原结合所得到的一种复合物称为免疫复合物，是由各种免疫细胞吞噬细菌，病毒，致敏物质共同死亡后结合而形成的，所以又称抗原--抗体复合物。它在正常情况下，小分子可溶性免疫复合物被肾小球滤过排出，大分子不溶免疫复合物被巨噬细胞吞噬消灭，这是机体防御机制的一部分。但在某些情况下，抗原与抗体在体内形成的免疫复合物，沉积于血管壁基底部，从而激活补体，被激活的补体，发挥溶解细菌、病毒、肿瘤细胞等作用。

永生化细胞：一种细胞生物学术语。指动物细胞脱分化失败，受到病毒感染，外源恶意代码转染，辐射或药剂作用后，细胞分裂次数限制机制和DNA检查-自毁机制失灵，导致具有无限分裂生长的能力的过程。细胞永生化是癌变的必经途径。

抗原和相应抗体结合形成的物质称为免疫复合物。由于免疫复合物能在循环血液中检测到，故亦称之为循环免疫复合物。它和补体、其他免疫活性物质结合，沉积在血管壁，可导致组织损伤及血管炎，引起一系列的疾病，如红斑狼疮。免疫复合物在体内存在有两种方式，一是存在于血液中的循环免疫复合物(CIC)，一是组织中固定的免疫复合物。免疫复合物的检测技术可分为抗原特异性方法和非抗原特异性方法。在大多数情况下，免疫复合物中的抗原性质不太清楚或非常复杂，所以抗原特异性方法并不常用。

根据形成免疫复合物的抗原-抗体的已知或未知的将CIC分为两大类，前者为特异性免疫复合物(如乙型肝炎的HBsAg-抗-HBs，甲状腺蛋白抗原-甲状腺球蛋白抗体形成的免疫复合物)；后者为非特异性免疫复合物(如肾小球肾炎、系统性红斑狼疮等)。

抗原与抗体在体内形成的免疫复合物，沉积于血管壁基底部，从而激活补体，被激活的补体，发挥溶解细菌、病毒、肿瘤细胞等作用。

免疫复合物的疾病有：

1)血清病：是由大小免疫复合物沉积在毛细血管壁，补体、吞噬细胞参与反应所致。

2)免疫复合物型肾小球炎：是由链球菌可溶性抗原与抗体结合，沉积于肾小球基底膜，激活补体，吸引中性粒细胞，释放各种酶类损伤肾小球所致。

3)类风湿性关节炎：是由类风湿因子与免疫球蛋白IgG结合形成的免疫复合物，沉积于关节骨膜、皮下组织等处引起类风湿关节炎等。

4)系统性红斑狼疮(SLE)：是自身免疫疾病的一种，其病理机制还未明确，但患者血清中常含有多种自身抗体和大量致病性循环免疫复合物(circμLating immune complexes，CIC)，CIC的出现会激活补体，并沉积于毛细血管壁、肾小球基底膜以及其他血管外组织中，造成炎症反应和免疫病理损伤。

免疫复合物的检测技术可分为抗原特异性方法和非抗原特异性方法。在大多数情况下，免疫复合物中的抗原性质不太清楚或非常复杂，所以抗原特异性方法并不常用。根据免疫复合物的物理学、免疫学和生物学特性，已经设计出很多检测CIC的方法。

(一)物理测定法

1.聚乙二醇法

聚乙二醇(PEG)是乙二醇聚合而成的无电荷形多糖分子，分子量变化范围较大，常用的分子量是6000。用3％～4％浓度的PEG可以选择性地将大分子免疫复合物沉淀下来，其作用机制尚不甚清楚。将PEG溶液与待检血清混合，置4℃冰箱过夜后离心，将沉淀物用PEG溶液充分洗涤，重新溶解于0.01mol/L的NaOH中，在波长280nm下测量溶液的吸光度；也可利用散射比浊法直接测定PEG沉淀的免疫复合物；以不同浓度的热聚合IgG作为参考标准来计算CIC的含量。

聚乙二醇法简单易行，可在临床工作中推广。但此法易受多种大分子蛋白和温度的干扰，特异性稍差。PEG法还特别适用于沉淀获得CIC，再进行解离分析其中的抗原与抗体。

2.冷球蛋白测定在某些病理情况下，血清中的免疫复合物具有可逆性冷沉淀的特性，于4℃冰箱中放置1～3天可自发地沉淀下来(参见第二十六章)；此种情况多见于冷球蛋白血症，所涉及的抗原包括自身的IgG、IgM、核苷酸、肿瘤相关抗原、肾小管上皮、甲状腺球蛋白、红细胞基质等，还有外源性抗原如乙肝病毒、EB病毒、巨细胞病毒、牛白蛋白和马蛋白等。

(二)补体相关测定法

IgG和IgM类抗体与抗原结合后，重链CH2区的补体结合点暴露，可以固定C1q并激活补体的系列反应，这是利用补体有关技术检测免疫复合物的基础。