[发明专利]一种免疫复合物吸附细胞的制作方法

权利要求书

1.一种免疫复合物吸附细胞的制作方法，其特征在于，步骤包括载体构建、病毒包装制作、永生化B淋巴细胞制作和基因转染，

所述载体构建的步骤为：

(1.1)设计三个基因，分别是CR1、CR2和CD93；这三个基因是补体系统的膜上信号蛋白受体，且分别结合血液中的C3b、C3d和C1q补体蛋白，起到捕获作用；

设计引物为：

CR1上游引物序列：5’-CTCGAGCGGAGCACAATGATTGGTCA-3’

CR1下游引物序列：5’-CCTAGG TGGCTCCTTTCCCACCAAAA-3’

CR2上游引物序列：5’-CTCGAGGGGTCTCGGAACGCATCC-3’

CR2下游引物序列：5’-CCTAGGTCCAAGCAATGAGGCACACA-3’

CD93上游引物序列：5’-CTCGAGGCCACACAGAGACCGGG-3’

CD93下游引物序列：5’-CCTAGGTGTCTCTAGGGCCACCTCAC-3’。

(1.2)DNA提取

为了克隆出全长的CR1、CR2和CD93序列，使用DNA抽屉试剂盒从海拉细胞中抽提出DNA，再以上述引物为模板，通过PCR反应分别克隆出三个基因的基因片段；

(1.3)质粒构建和扩增、获取

根据现代生物分子技术，通过酶切酶连技术，将pLVX-IRES-Neo从XhoI和BamHI酶切位点切开，再使用连接酶将之前获得的基因片段连接到pLVX-IRES-Neo中；将pLVX-IRES-Neo转入感受态菌株中，扩增培养，最后抽提感受态菌株的质粒；所述XhoI酶切位点序列为：CTCGAG；BamHI酶切位点序列为：GGATCC。

2.根据权利要求1所述的免疫复合物吸附细胞及其制作方法，其特征在于，步骤(1.2)中所述的PCR反应的体系为：2μl PCR缓冲液，2μl10mM dNTP和0.25U exTaq聚合酶；PCR扩增程序：先94℃、30s，58℃、30s，74℃、50s，35个循环；然后72℃，10min。

3.根据权利要求1所述的免疫复合物吸附细胞及其制作方法，其特征在于，所述C1q、C3b和C3d受体基因，分别在基因上游引物序列的5’端加入了XhoI酶切位点，在下游引物序列5’端加入了BamHI酶切位点。

4.根据权利要求1所述的免疫复合物吸附细胞及其制作方法，其特征在于，所述XhoI酶切位点和BamHI酶切位点分别对应载体pLVX-IRES-Neo的两个相同的酶切位点。