[发明专利]一种用于血液中全基因组DNA提取试剂盒及其方法

摘要

本发明涉及一种从血液中提取全基因组DNA的试剂盒及其使用方法。其特征在于试剂盒包括红细胞裂解液、白细胞洗涤液、消化液、蛋白酶K、纯化液、gDNA盐析液、gDNA洗涤液及gDNA洗脱液等。本发明血液中全基因组DNA提取试剂盒使用方法的特征在于采用裂解红细胞后洗涤得到白细胞，将含有蛋白酶K的消化液裂解白细胞，通过改进的氯化锂纯化液进一步纯化后盐析液层析获得高纯度全基因组DNA。本发明试剂盒提取血液中全基因组DNA时，不用事先对血液中进行血浆和血清分离，只需取新鲜或冰冻的抗凝全血，最低需要的血量可达到20μl或者血斑即可。本发明试剂盒获得纯度更高的全基因组DNA可完全解链和高效地进行PCR扩增，用于PCR扩增、基因表达、基因测序、全基因组测序、外显子组测序、基因突变和单核苷酸多态性等科研或临床诊断分析。

主权项

一种用于从血液中提取高纯度全基因组DNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括红细胞裂解液、白细胞洗涤液、消化液、蛋白酶K、纯化液、gDNA盐析液、gDNA洗涤液及gDNA洗脱液；采用所述试剂盒提取血液中全基因组DNA时，不用事先对血液中进行血浆和血清分离，只需取新鲜或冰冻的抗凝全血；所述的试剂盒，各组成分别为：1)红细胞裂解液：灭菌的去离子超纯水，400ml/瓶；2)白细胞洗涤液：体积比为0.1％的聚乙二醇辛基苯基醚(Triton‑X100)，300ml/瓶；3)消化液：含1mol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris‑HCl)，0.5mol/L乙二胺四乙酸(EDTA)，0.2mol/LNaCl，质量体积比为10g/ml的十二烷基硫酸(SDS)，40ml/支；4)蛋白酶K：为20mg/ml的蛋白酶K，1ml/支；5)纯化液：为5‑7.5mol/L的氯化锂(LiCl)，40ml/瓶；6)gDNA盐析液：无水乙醇，500ml/瓶；7)gDNA洗涤液：体积比为80％的乙醇，40ml/瓶；8)gDNA洗脱液：含1mol/L Tris‑HCl，0.5mol/L EDTA，10ml/支。