[发明专利]一种高特异性的叶酸完全抗原合成方法及其应用

摘要

一种高特异性的叶酸完全抗原合成方法及其应用，属于生物化工技术领域。本发明是在载体蛋白溶液中加入6-氨基己酸与水溶性碳二亚胺后室温下反应，透析后得到修饰了连接臂的载体蛋白B。叶酸（N-{4-[(2-氨基-1,4-二氢-4-氧代-6-喋啶)甲氨基]苯甲酰基}-L-谷氨酸）溶解于二甲亚砜，加入二环己基碳二亚胺与羟基琥珀酰亚胺，反应生成叶酸衍生物，再与载体蛋白B连接臂上的氨基进行偶联，得到完全抗原。结果表明，用本发明的抗原免疫动物得到的抗血清效价达81000，检测限0.042ng/mL，半抑制浓度0.3ng/mL。产生的抗体特异性高、灵敏度高。本发明的抗原或抗体用于免疫亲和柱的制备及建立酶联免疫吸附分析方法和胶体金试纸快速检测法，用于检测叶酸残留。

主权项

一种高特异性的叶酸完全抗原合成方法，其特征在于步骤为：在载体蛋白溶液中加入6‑氨基己酸ε‑ACA与水溶性碳二亚胺EDC，在室温下反应，透析后得到修饰了连接臂的载体蛋白B；将叶酸N‑{4‑[(2‑氨基‑1,4‑二氢‑4‑氧代‑6‑喋啶)甲氨基]苯甲酰基}‑L‑谷氨酸溶解于二甲亚砜DMSO中，加入二环己基碳二亚胺DCC与N‑羟基丁二酰亚胺NHS，反应生成叶酸衍生物，再加入载体蛋白B，调节反应pH值7.4，与载体蛋白B上的氨基进行偶联，透析，得到高特异性的叶酸完全抗原。