[发明专利]一种高特异性的叶酸完全抗原合成方法及其应用

权利要求书

1.一种高特异性的叶酸完全抗原合成方法，其特征在于步骤为：在载体蛋白溶液中加入6-氨基己酸ε-ACA与水溶性碳二亚胺EDC，在室温下反应，透析后得到修饰了连接臂的载体蛋白B；将叶酸N-{4-[(2-氨基-1,4-二氢-4-氧代-6-喋啶)甲氨基]苯甲酰基}-L-谷氨酸溶解于二甲亚砜DMSO中，加入二环己基碳二亚胺DCC与N-羟基丁二酰亚胺NHS，反应生成叶酸衍生物，再加入载体蛋白B，调节反应pH值7.4，与载体蛋白B上的氨基进行偶联，透析，得到高特异性的叶酸完全抗原。

2.根据权利要求1所述高特异性的叶酸完全抗原合成方法，其特征在于：所述载体蛋白为牛血清白蛋白BSA或鸡卵清白蛋白OVA。

3.根据权利要求1所述高特异性的叶酸完全抗原合成方法，其特征在于具体步骤如下：

（1）修饰载体蛋白：取载体蛋白50mg溶解于5mL pH9.6碳酸盐缓冲溶液中，再加入100mg 6-氨基己酸，30mg水溶性碳二亚胺；调节体系pH值于6~8，室温下反应4h；用PBS缓冲液透析2天，期间换水4次，即得到修饰了连接臂的载体蛋白B；

（2）叶酸完全抗原的制备：

取25mg叶酸，加入2.5mL DMSO溶解，调节pH值为7.4，再分别加入10mg N-羟基丁二酰亚胺NHS，23mg DCC，室温下避光混匀，搅拌反应4h，将步骤（1）制备的载体蛋白B 100mg加入反应液中，调节pH值为8.5，在室温25℃下避光反应2h；用PBS缓冲液透析2天，期间换水4次，即得到叶酸完全抗原。

4.权利要求1所述高特异性的叶酸完全抗原的应用，其特征在于：通过叶酸完全抗原化合物免疫动物得到多克隆抗体或单克隆抗体，并应用于检测叶酸中。