[发明专利]一种新型经血来源间充质干细胞分离方法

摘要

本发明提供一种新型经血来源间充质干细胞分离方法，属于从经血中分离干细胞的方法领域。为了解决传统方法中采用淋巴分离液法，其离心时间长，对细胞的损伤较大，细胞得率低等问题。本发明采用来源广泛的经血为材料，采集过程中采用特殊的保存液进行保存，然后通过淋巴细胞分离管的密度梯度离心法进行初步分离，对分离的离心时间和离心转速进行优化，然后通过干细胞贴壁生长的特性进行再次分离，将干细胞分离和扩增同时进行，在分离过程中最大限度地维持干细胞活性，得到的经血来源间充质干细胞纯度高、数量大、应用价值高。本发明操作简单，成本低。

主权项

一种新型经血来源间充质干细胞分离方法，其特征在于，包括以下内容：a．收集经血：将经血转移到1~2倍经血体积的磷酸盐缓冲液中，得到经血混合物，并将混合物于4℃下保存；    b．将步骤a中得到的混合物在48h内，加入等体积的PBS缓冲液充分混匀，通过 200目筛网过滤得滤液，将滤液用淋巴细胞分离管于2670rpm转速下离心17min，得到4层分离液，除去最上层分离液，提取中间白膜层物质，得到混合物A； c. 将步骤b中得到的混合物A加入PBS缓冲液中洗涤2~3次，然后离心，取沉淀细胞B；d. 将步骤c中得到的沉淀细胞B接种到培养基中，于37℃、体积分数5% CO₂的饱和湿度环境下进行培养；e. 收集步骤d中所述的培养的细胞，即为所述的经血来源间充质干细胞。