[发明专利]一种新型经血来源间充质干细胞分离方法

权利要求书

1.一种新型经血来源间充质干细胞分离方法，其特征在于，包括以下内容：

a．收集经血：将经血转移到1~2倍经血体积的磷酸盐缓冲液中，得到经血混合物，并将混合物于4℃下保存；

b．将步骤a中得到的混合物在48h内，加入等体积的PBS缓冲液充分混匀，通过 200目筛网过滤得滤液，将滤液用淋巴细胞分离管于2670rpm转速下离心17min，得到4层分离液，除去最上层分离液，提取中间白膜层物质，得到混合物A；

c. 将步骤b中得到的混合物A加入PBS缓冲液中洗涤2~3次，然后离心，取沉淀细胞B；

d. 将步骤c中得到的沉淀细胞B接种到培养基中，于37℃、体积分数5% CO₂的饱和湿度环境下进行培养；

e. 收集步骤d中所述的培养的细胞，即为所述的经血来源间充质干细胞。

2.根据权利要求1所述的新型经血来源间充质干细胞分离方法，其特征在于，步骤a中所述的磷酸盐缓冲液的pH值为7.2，所述的磷酸盐缓冲液包括质量浓度为5ug/ml的EDTA、50ug/ml的枸橼酸钠、50~100mg/ml的海藻糖、0.03~0.05mg/ml青霉素、0.05~0.1mg/ml链霉素、0.05~0.1mg/ml氟康唑。

3.根据权利要求1所述的新型经血来源间充质干细胞分离方法，其特征在于，步骤c中所述的PBS缓冲液的配方为：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na₂HPO₄ 10mmol/L， KH₂PO₄ 2mmol/L；所述PBS缓冲液的pH值为7.2。

4.根据权利要求1所述的新型经血来源间充质干细胞分离方法，其特征在于，步骤d中所述的培养基包括质量浓度为1.34% DMEM粉末和0.22%NaHCO₃。

5.根据权利要求1所述的新型经血来源间充质干细胞分离方法，其特征在于，步骤d中所述的培养包括以下内容：每隔3~4天去掉未贴壁的细胞，并更换培养基，培养的总时间为7~10天。

6.根据权利要求1所述的新型经血来源间充质干细胞分离方法，其特征在于，步骤d中所述的培养基，细胞首次传代前的培养基均含0.03~0.05mg/ml青霉素、0.05~0.1mg/ml链霉素、0.05~0.1mg/ml氟康唑，首次传代后的细胞所用培养基则不添加抗生素。