[发明专利]一种解淀粉芽孢杆菌NCPSJ7抗菌蛋白产品及其制备方法

摘要

本发明公开了一种解淀粉芽孢杆菌NCPSJ7抗菌蛋白产品及其制备方法。它是将解淀粉芽孢杆菌NCPSJ7发酵液离心收集上清液，发酵上清液经过硫酸铵沉淀及超滤脱盐浓缩，然后经过阴离子交换柱层析及超滤脱盐浓缩，并进行喷雾干燥得到抗菌蛋白产品。上述方法制备的抗菌蛋白产品，其主要成分为：24kDa和36kDa两种抗菌蛋白，这两种抗菌蛋白的总含量占喷干粉质量的60％以上。该抗菌蛋白产品的复水性能良好，水溶性强，同时抑菌性能良好，具有工业化应用前景，可被应用于果蔬防腐保鲜、食品添加剂、鱼药、兽药等领域。

主权项

一种解淀粉芽孢杆菌NCPSJ7抗菌蛋白产品的制备方法，其特征是，包括以下步骤：(1)硫酸铵沉淀将解淀粉芽孢杆菌NCPSJ7发酵液离心，收集发酵上清液，边搅拌边加入固体硫酸铵至硫酸铵浓度为50‑60％饱和度，4℃静置过夜；离心，收集沉淀，加入20‑50mM pH6.5‑8.0的磷酸盐缓冲液复溶，离心，收集上清液，即为抗菌蛋白粗提液；(2)超滤脱盐浓缩将步骤(1)的抗菌蛋白粗提液置于超滤装置中，于4℃，采用5000Da的超滤膜过滤，截留部分添加20‑50mM pH6.5‑8.0的磷酸盐缓冲液，重复超滤2‑4次，收集截留部分，即为脱盐浓缩后的抗菌蛋白粗提液；(3)抗菌蛋白的进一步纯化采用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析，将步骤(2)脱盐浓缩后的抗菌蛋白粗提液上样，然后先采用50mM pH6.5‑7.0的磷酸盐缓冲液洗脱1个柱体积，再采用0.25M的NaCl溶液洗脱1‑2个柱体积，洗脱除去杂蛋白；最后采用0.25‑0.6M的NaCl溶液梯度洗脱4‑5个柱体积，收集到2个洗脱峰，即为抗菌蛋白样品；(4)再次超滤脱盐浓缩将步骤(3)的抗菌蛋白样品置于超滤装置中，于4℃，采用5000Da的超滤膜过滤，截留部分添加20‑50mM pH6.5‑8.0的磷酸盐缓冲液，重复2‑4次，收集截留部分，即为脱盐浓缩后的抗菌蛋白样品；(5)喷雾干燥将步骤(4)脱盐浓缩后的抗菌蛋白样品在进口温度130℃，物料流速3.3mL/min条件下进行喷雾干燥，收集喷干粉，即为抗菌蛋白产品。