[发明专利]一种解淀粉芽孢杆菌NCPSJ7抗菌蛋白产品及其制备方法

权利要求书

1.一种解淀粉芽孢杆菌NCPSJ7抗菌蛋白产品的制备方法，其特征是，包括以下步骤：

(1)硫酸铵沉淀

将解淀粉芽孢杆菌NCPSJ7发酵液离心，收集发酵上清液，边搅拌边加入固体硫酸铵至硫酸铵浓度为50-60％饱和度，4℃静置过夜；离心，收集沉淀，加入20-50mM pH6.5-8.0的磷酸盐缓冲液复溶，离心，收集上清液，即为抗菌蛋白粗提液；

(2)超滤脱盐浓缩

将步骤(1)的抗菌蛋白粗提液置于超滤装置中，于4℃，采用5000Da的超滤膜过滤，截留部分添加20-50mM pH6.5-8.0的磷酸盐缓冲液，重复超滤2-4次，收集截留部分，即为脱盐浓缩后的抗菌蛋白粗提液；

(3)抗菌蛋白的进一步纯化

采用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析，将步骤(2)脱盐浓缩后的抗菌蛋白粗提液上样，然后先采用50mM pH6.5-7.0的磷酸盐缓冲液洗脱1个柱体积，再采用0.25M的NaCl溶液洗脱1-2个柱体积，洗脱除去杂蛋白；最后采用0.25-0.6M的NaCl溶液梯度洗脱4-5个柱体积，收集到2个洗脱峰，即为抗菌蛋白样品；

(4)再次超滤脱盐浓缩

将步骤(3)的抗菌蛋白样品置于超滤装置中，于4℃，采用5000Da的超滤膜过滤，截留部分添加20-50mM pH6.5-8.0的磷酸盐缓冲液，重复2-4次，收集截留部分，即为脱盐浓缩后的抗菌蛋白样品；

(5)喷雾干燥

将步骤(4)脱盐浓缩后的抗菌蛋白样品在进口温度130℃，物料流速3.3mL/min条件下进行喷雾干燥，收集喷干粉，即为抗菌蛋白产品。

2.如权利要求1所述的一种解淀粉芽孢杆菌NCPSJ7抗菌蛋白产品的制备方法，其特征是，所述步骤(3)的NaCl溶液均采用50mM pH6.5-7.0的磷酸盐缓冲液配制。

3.如权利要求1所述的一种解淀粉芽孢杆菌NCPSJ7抗菌蛋白产品的制备方法，其特征是，所述步骤(1)的离心为：12000-13000rpm离心10-20分钟。

4.权利要求1-3中任意一项所制备的解淀粉芽孢杆菌NCPSJ7抗菌蛋白产品，其特征是，其分子量为20-40kDa，主要成分为：24kDa和36kDa的两种抗菌蛋白，这两种抗菌蛋白的总含量占解淀粉芽孢杆菌NCPSJ7抗菌蛋白产品总量的60％以上。

5.一种以权利要求4所述的解淀粉芽孢杆菌NCPSJ7抗菌蛋白产品为主要成分的柑橘防腐保鲜剂，其特征是，由下述重量份的原料制成：解淀粉芽孢杆菌NCPSJ7抗菌蛋白产品50-90份，氨基寡糖素10-20份，烷基多糖苷3-5份，花椒油1-2份，甘油2-3份。