[发明专利]一种基于DNAzyme探针的乙肝病毒检测方法

摘要

本发明属于分子生物学技术领域，公开了一种利用DNAzyme探针来进行定性和定量检测乙肝病毒DNA的方法。本发明针对现有技术的局限性，以PCR扩增为基础检测平台，通过引入3’‑氨基修饰的DNAzyme探针，实现了乙肝病毒的一步法定性及定量检测。该技术具有灵敏度高，特异性强，检测线性范围广，成本低廉，准确度高，方便操作等优点，为乙肝病毒提供了简单快速、准确高效、经济实用的检测方法。

主权项

1.一种基于DNAzyme探针的乙肝病毒检测方法，其特征是：在PCR体系中加入检测乙型肝炎病毒基因保守区域的特异性引物和DNAzyme探针对乙肝病毒基因保守区域进行扩增，扩增过程中利用核酸聚合酶5’‑3’外切酶活性对DNAzyme探针进行部分消化使其产生大量活性DNAzyme序列，最终通过检测由活性DNAzyme序列产生的比色或荧光信号实现对乙肝病毒感染样本的定性和定量检测；当待扩增的目标核酸序列为乙肝病毒S区的基因保守区域时，其特异性的正反向引物是(1)正向引物HBV‑F:5’‑CCTGGTTATCGCTGGATGTGT‑3’，(2)反向引物HBV‑R:5’‑GGACAAACGGGCAACATACCTT‑3’，特异性的DNAzyme探针是5’‑CCCTACCCATTCATCCTGCTGCTATGCCTCATCTTCTTTGGGTAGGGCGGGTTGGGAAA‑NH2‑3’；DNAzyme探针为经3’‑端氨基修饰的探针；本方法不以疾病诊断和治疗为目的；引入了UNG防污染体系为：扩增条件：20℃10min；95℃2min；94℃30s，60℃90s，35‑40个循环。