[发明专利]一种基于DNAzyme探针的乙肝病毒检测方法

权利要求书

1.一种基于DNAzyme探针的乙肝病毒检测方法，其特征是：在PCR体系中加入检测乙型肝炎病毒基因保守区域的特异性引物和DNAzyme探针对乙肝病毒基因保守区域进行扩增，扩增过程中利用核酸聚合酶5’-3’外切酶活性对DNAzyme探针进行部分消化使其产生大量活性DNAzyme序列，最终通过检测由活性DNAzyme序列产生的比色或荧光信号实现对乙肝病毒感染样本的定性和定量检测；当待扩增的目标核酸序列为乙肝病毒S区的基因保守区域时，其特异性的正反向引物是(1)正向引物HBV-F:5’-CCTGGTTATCGCTGGATGTGT-3’，(2)反向引物HBV-R:5’-GGACAAACGGGCAACATACCTT-3’，特异性的DNAzyme探针是5’-CCCTACCCATTCATCCTGCTGCTATGCCTCATCTTCTTTGGGTAGGGCGGGTTGGGAAA-NH2-3’；DNAzyme探针为经3’-端氨基修饰的探针；本方法不以疾病诊断和治疗为目的；引入了UNG防污染体系为：

扩增条件：20℃10min；95℃2min；94℃30s，60℃90s，35-40个循环。

2.根据权利要求1所述的基于DNAzyme探针的乙肝病毒检测方法，其特征是：所述DNAzyme探针为一发夹探针，在常温下或未检测到乙肝病毒基因序列时，通过探针的DNA碱基互补作用，活性DNAzyme序列被封闭在发夹中，不产生检测信号；而在PCR过程中检测到乙肝病毒基因序列时，DNAzyme探针打开并与目标核酸序列互补，引物延伸时核酸聚合酶利用其5’-3’外切酶活性部分消化与目标核酸序列互补的DNAzyme探针并产生大量活性DNAzyme序列，从而获得可检测的颜色或荧光信号。

3.根据权利要求1所述的基于DNAzyme探针的乙肝病毒检测方法，其特征是：一步反应即可完成样本检测。

4.根据权利要求1所述的基于DNAzyme探针的乙肝病毒检测方法，其特征是：当活性DNAzyme为与hemin结合发挥具有过氧化物酶活性的DNAzyme时，在乙肝病毒样本的扩增产物中加入hemin以及显色底物和H₂O₂，利用DNAzyme/hemin复合物催化H₂O₂氧化显色底物发生颜色变化，通过观察颜色差异对乙肝病毒进行定性检测，或通过测定溶液在414nm处的光吸收值进行定量检测；所述显色底物是ABTS或DAB。