[发明专利]从猪血中分离纯化纤维连接蛋白的生产工艺在审
| 申请号： | 201410120015.1 | 申请日： | 2014-03-27 |
| 公开（公告）号： | CN104945495A | 公开（公告）日： | 2015-09-30 |
| 发明（设计）人： | 董浩;张秀民;胡瑞天;陆银胜;罗志良;王雅静;高振宏;程榆茗 | 申请（专利权）人： | 安徽宝迪肉类食品有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/47 | 分类号： | C07K14/47;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30 |
| 代理公司： | 天津盛理知识产权代理有限公司 12209 | 代理人： | 董一宁 |
| 地址： | 235000 安徽省淮北市烈山区宋疃*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 一种从猪血中分离纯化纤维连接蛋白的生产工艺，包括如下步骤：①从全血中分离出血浆和血细胞；②盐析：向上层血浆中加入酸性Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液并充分混匀，然后边搅拌边加入硫酸铵，使其饱和度达到20%，并调节pH至碱性，然后放入冰箱冷藏1.5-2.5h使之充分沉淀，最后再经离心所得沉淀主要成分即为纤维连接蛋白；③透析除盐：将②步沉淀溶于酸性PBS缓冲液中,装入透析袋内进行透析、浓缩，即得纤维连接蛋白粗品；④纯化：将③步所得纤维连接蛋白粗品上样于明胶Sepharose-4B柱进行亲和层析后，经由特定容积洗脱即可得到纯化后的纤维连接蛋白。本发明工艺简单，所需设备要求较低，适合工业化生产。 | ||
| 搜索关键词： | 猪血 分离 纯化 纤维 连接 蛋白 生产工艺 | ||
【主权项】：
一种从猪血中分离纯化纤维连接蛋白的生产工艺，其特征在于：包括如下步骤：①从全血中分离出血浆和血细胞；②盐析：向上层血浆中加入酸性Na2HPO4‑NaH2PO4缓冲液并充分混匀，然后边搅拌边加入硫酸铵，使其饱和度达到20%，并调节pH至碱性，然后放入冰箱冷藏1.5‑2.5h使之充分沉淀，最后再经离心所得沉淀主要成分即为纤维连接蛋白；③透析除盐：将②步沉淀溶于酸性PBS缓冲液中,装入透析袋内进行透析,每8‑10h换一次透析液,直至用10%BaCl2检测无SO42‑为止，收集透析袋内液体进行浓缩操作，即得纤维连接蛋白粗品；④纯化：先用Tris‑HCl缓冲液作为平衡液、碱性TB缓冲液作为洗脱液,将③步所得纤维连接蛋白粗品上样于明胶Sepharose‑4B柱进行亲和层析，用TB缓冲液将不吸附部分洗脱，然后用6mol/L尿素洗脱纤维连接蛋白，收集洗脱液，合并洗脱液，用TB缓冲液进行透析除去尿素，透析后浓缩即得纤维连接蛋白纯品。
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