[发明专利]从猪血中分离纯化纤维连接蛋白的生产工艺

权利要求书

1.一种从猪血中分离纯化纤维连接蛋白的生产工艺，其特征在于：包括如下步骤：

①从全血中分离出血浆和血细胞；

②盐析：向上层血浆中加入酸性Na₂HPO₄-NaH₂PO₄缓冲液并充分混匀，然后边搅拌边加入硫酸铵，使其饱和度达到20%，并调节pH至碱性，然后放入冰箱冷藏1.5-2.5h使之充分沉淀，最后再经离心所得沉淀主要成分即为纤维连接蛋白；

③透析除盐：将②步沉淀溶于酸性PBS缓冲液中,装入透析袋内进行透析,每8-10h换一次透析液,直至用10%BaCl₂检测无SO₄^2-为止，收集透析袋内液体进行浓缩操作，即得纤维连接蛋白粗品；

④纯化：先用Tris-HCl缓冲液作为平衡液、碱性TB缓冲液作为洗脱液,将③步所得纤维连接蛋白粗品上样于明胶Sepharose-4B柱进行亲和层析，用TB缓冲液将不吸附部分洗脱，然后用6mol/L尿素洗脱纤维连接蛋白，收集洗脱液，合并洗脱液，用TB缓冲液进行透析除去尿素，透析后浓缩即得纤维连接蛋白纯品。

2.根据权利要求1所述的从猪血中分离纯化纤维连接蛋白的生产工艺，其特征在于：上述步骤②Na₂HPO₄-NaH₂PO₄缓冲液的pH=6.3，并且Na₂HPO₄-NaH₂PO₄缓冲液的加入量与上层血浆等体积。

3.根据权利要求1所述的从猪血中分离纯化纤维连接蛋白的生产工艺，其特征在于：上述步骤②中Na₂HPO₄-NaH₂PO₄缓冲液的浓度为0.0175mol/L。

4.根据权利要求1所述的从猪血中分离纯化纤维连接蛋白的生产工艺，其特征在于：上述步骤②中离心的速度为3000r/min，时间为15min。

5.根据权利要求1所述的从猪血中分离纯化纤维连接蛋白的生产工艺，其特征在于：上述步骤③中PBS缓冲液的pH=6.3。

6.根据权利要求1所述的从猪血中分离纯化纤维连接蛋白的生产工艺，其特征在于：上述步骤④中TB缓冲液的浓度为0.05mol/L，pH=7.5；Tris-HCl缓冲液中含5mmol/L苯脒。