[发明专利]抗丙肝病毒药物高通量筛选模型及其应用

摘要

本发明提供一种新型的抗丙肝病毒药物高通量筛选模型，可应用于人类丙型肝炎病毒感染机制的研究及药物筛选，它是一种针对HCV侵染进行高效应答的报告系统。当HCV侵入细胞后，其所表达的蛋白酶NS3/4A将切割并释放通过蛋白MAVS锚定于线粒体外膜的四环素调控反式激活子rtTA，在强力霉素或四环素存在的情况下激活报告基因的表达，并在一定时间内观察到明显的荧光信号；或在GCV存在时导致细胞的死亡。该系统操作简单、实验周期短、效率高、稳定性强，可广泛应用于HCV侵染的实时定量观测、流式细胞分选、高通量化合物筛选、高通量宿主细胞靶基因筛选以及HCV侵染的分子机制研究。

主权项

抗丙肝病毒药物高通量筛选模型，其特征在于，其构建方法包括以下步骤：1）报告质粒的构建：以慢病毒包装质粒为骨架，其中至少串联连接有两个基因表达盒，一个基因表达盒用于表达rtTA‑MAVS融合蛋白，另一个基因表达盒用于表达tight‑TRE启动子下游的报告蛋白，两个基因表达盒之后连接有抗性基因，即构建得到报告质粒；其中，rtTA为四环素调控反式激活子，MAVS为线粒体外膜蛋白；2）采用慢病毒包装系统产生含有上述报告质粒的慢病毒，然后侵染HCV宿主细胞，将侵染的细胞作为针对HCV NS3/4A蛋白酶的抗丙肝病毒药物高通量筛选模型，向含有上述侵染细胞的培养基中加入待筛选的药物化合物，培养一段时间后，根据报告蛋白的表达和/或细胞的存活情况，来评价该药物化合物对丙肝病毒的抑制活性。