[发明专利]一种从发酵液中提取纯化人类松弛素-2的方法无效
| 申请号： | 201410046069.8 | 申请日： | 2014-02-10 |
| 公开（公告）号： | CN103788207A | 公开（公告）日： | 2014-05-14 |
| 发明（设计）人： | 厉保秋;房世红;袁强 | 申请（专利权）人： | 济南环肽医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/64 | 分类号： | C07K14/64;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20 |
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| 地址： | 250101 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种从发酵液中提取纯化人类松弛素-2的方法，将发酵液离心后过截流分子量3000的醋酸纤维素超滤膜过滤，依次上SephadexG-50柱和Synchropak RP-P C18反相HPLC层析柱进行层析纯化，然后通过低温旋蒸浓缩，冷冻干燥，得纯化的人类松弛素-2。本发明的从发酵液中提取纯化人类松弛素-2的方法，大大简化了人类松弛素-2的提取纯化步骤，缩短了提取纯化时间，工艺条件易控制，适于大规模工业化生产。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 发酵 提取 纯化 人类 松弛 方法 | ||
【主权项】：
一种从发酵液中提取纯化人类松弛素‑2的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）取发酵液，5000～7000rmp离心10～60分钟，收集上清液；2）步骤1）的上清液，加入4倍体积的70％丙酮，用乙酸‑乙酸钠缓冲溶液调pH为5.0，加入尿素，使溶液中尿素的浓度为5～15mol/L，2℃～8℃静置过夜；3）步骤2）的溶液，12000～16000rmp离心10～60分钟，过截流分子量3000的醋酸纤维素超滤膜，收集浓缩液；4）步骤3）的浓缩液上SephadexG‑50柱，柱长22厘米，洗脱溶剂为含0.15mol/L氯化钠的1mol/L乙酸，流速为15mL /小时，收集洗脱液，真空低温浓缩；5）步骤4）的浓缩液上Synchropak RP‑P C18反相HPLC层析柱，柱长50厘米，用含0.1%的三氟乙酸平衡和洗涤，用含50%乙腈的0.1% 三氟乙酸溶液洗脱25分钟，洗脱速度为90mL/小时，再用含80%乙腈的0.1% 三氟乙酸溶液洗脱30分钟，洗脱速度为90mL/小时，收集洗脱液；6）步骤5）的洗脱液，低温旋蒸浓缩，冷冻干燥，得纯化的人类松弛素‑2。
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