[发明专利]一种从发酵液中提取纯化人类松弛素-2的方法

权利要求书

1.一种从发酵液中提取纯化人类松弛素-2的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）取发酵液，5000～7000rmp离心10～60分钟，收集上清液；

2）步骤1）的上清液，加入4倍体积的70％丙酮，用乙酸-乙酸钠缓冲溶液调pH为5.0，加入尿素，使溶液中尿素的浓度为5～15mol/L，2℃～8℃静置过夜；

3）步骤2）的溶液，12000～16000rmp离心10～60分钟，过截流分子量3000的醋酸纤维素超滤膜，收集浓缩液；

4）步骤3）的浓缩液上SephadexG-50柱，柱长22厘米，洗脱溶剂为含0.15mol/L氯化钠的1mol/L乙酸，流速为15mL /小时，收集洗脱液，真空低温浓缩；

5）步骤4）的浓缩液上Synchropak RP-P C18反相HPLC层析柱，柱长50厘米，用含0.1%的三氟乙酸平衡和洗涤，用含50%乙腈的0.1% 三氟乙酸溶液洗脱25分钟，洗脱速度为90mL/小时，再用含80%乙腈的0.1% 三氟乙酸溶液洗脱30分钟，洗脱速度为90mL/小时，收集洗脱液；

6）步骤5）的洗脱液，低温旋蒸浓缩，冷冻干燥，得纯化的人类松弛素-2。

2.根据权利要求1所述的提取纯化人类松弛素-2的方法，其特征在于，所述步骤1）离心速度为6000rmp，离心时间为15分钟。

3.根据权利要求1所述的提取纯化人类松弛素-2的方法，其特征在于，所述步骤3）离心速度为14000rmp，离心时间为30分钟。

4.根据权利要求1所述的提取纯化人类松弛素-2的方法，其特征在于，所述步骤4）中尿素的浓度为7mol/L。