[发明专利]鼠灰链霉菌AMP脱氨酶基因的乳酸克鲁维酵母真核表达方法有效
| 申请号： | 201410040528.1 | 申请日： | 2014-01-28 |
| 公开（公告）号： | CN103757035A | 公开（公告）日： | 2014-04-30 |
| 发明（设计）人： | 张梁;石贵阳;方炜;丁重阳;顾正华 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/55 | 分类号： | C12N15/55;C12N15/81;C12N9/78 |
| 代理公司： | 无锡华源专利事务所(普通合伙) 32228 | 代理人： | 冯智文 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开一种鼠灰链霉菌AMP脱氨酶基因的乳酸克鲁维酵母真核表达方法。该方法以鼠灰链霉菌基因组为模板，设计特异性引物扩增AMP脱氨酶基因序列，在其两端分别引入酶切位点，并亚克隆入表达载体pKLAC1构建得到重组质粒，酶切线性化后电转化乳酸克鲁维酵母，筛选阳性克隆转化子，再利用pKLAC1通用引物筛选出多拷贝转化子，最后经种子培养和液体发酵培养，取发酵液上清，即得AMP脱氨酶表达产物。本发明首次在乳酸克鲁维酵母中成功表达了鼠灰链霉菌来源的AMP脱氨酶，实验结显示该重组酶具有较高的酶活，且酶活性稳定，可应用于食品、医药等领域。 | ||
| 搜索关键词： | 鼠灰链 霉菌 amp 脱氨酶 基因 乳酸 克鲁 酵母 表达 方法 | ||
【主权项】：
鼠灰链霉菌AMP脱氨酶基因的乳酸克鲁维酵母真核表达方法，其特征在于：以鼠灰链霉菌基因组为模板，设计特异性引物扩增AMP脱氨酶基因序列，在其两端分别引入酶切位点，并亚克隆入表达载体pKLAC1构建得到重组质粒，酶切线性化后电转化乳酸克鲁维酵母，筛选阳性克隆转化子，再利用pKLAC1通用引物筛选出多拷贝转化子，最后经种子培养和液体发酵培养，取发酵液上清，即得AMP脱氨酶表达产物。
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