[发明专利]新的胚胎干细胞培养体系及胚胎干细胞建系方法

摘要

本发明涉及生物技术领域、具体涉及新的胚胎干细胞培养体系以及采用本发明所述培养体系提高胚胎干细胞建系效率的方法。本发明所述培养体系包括：DMEMF12、N‑2supplement、B‑27supplement、β‑巯基乙醇、谷氨酰胺、胰岛素、牛血清白蛋白、双抗(青霉素+链霉素)、Pd0325901、Chir99021、白血病抑制因子(LIF)、Knockout Serum Replacement(KoSR)、P53inhibitor、Y‑27632、P38MAPK inhibitor和Forskolin。本发明新型的培养体系及其方法既能保证得到稳定的胚胎干细胞系，又能够显著性提高胚胎干细胞的建系效率，同时还能维持胚胎干细胞的多能性，使其始终处于优良的生长状态，从而更好地推动胚胎干细胞在转基因和疾病模型领域的广泛应用。

主权项

1.一种胚胎干细胞培养体系，其特征在于，所述培养体系包括：DMEMF12、N‑2 Supplement、B‑27 Supplement、β‑巯基乙醇、谷氨酰胺、胰岛素、牛血清白蛋白、青霉素+链霉素的双抗、Pd0325901、Chir99021、白血病抑制因子、Knockout Serum Replacement、P53 inhibitor、Y‑27632、P38 MAPK inhibitor和Forskolin；其中，所述培养体系以总溶液为计算基础，其中DMEMF12为90％～97％；N‑2 Supplement为1:50～1:200；B‑27 Supplement为1:25～1:100；β‑巯基乙醇为0.05～0.2mM；谷氨酰胺为1mM～5mM；胰岛素为10μg/mL～50μg/mL；牛血清白蛋白为0.001％～0.005％；青霉素+链霉素的双抗为1：50～1：100；Pd0325901为0.8μM～2μM；Chir99021为3μM～10μM；白血病抑制因子为1000U/mL～10000U/mL；Knockout Serum Replacement为3％～10％；P53 inhibitor为2μM～50μM；Y‑27632为5μM～10μM；P38 MAPK inhibitor为5μM～20μM；和Forskolin为10μM～20μM。