[发明专利]一种便携快速检测赭曲霉毒素A的方法

摘要

本发明公开了一种便携快速检测赭曲霉毒素A的方法。首先制备蔗糖转化酶-端炔修饰DNA。随后将生物素-叠氮修饰DNA结合在磁珠表面，并加入不同浓度的赭曲霉毒素A混合。然后加入先前制备好的蔗糖转化酶-端炔修饰DNA、CuSO₄溶液、抗坏血酸溶液。其中抗坏血酸溶液能还原Cu(II)得到Cu(I)化合物，催化生物素-叠氮修饰DNA与蔗糖转化酶-端炔修饰DNA发生点击化学反应。反应结束后取上层清液加入至蔗糖溶液中，蔗糖转化酶能有效催化溶液中蔗糖转化为葡萄糖。最后采用血糖仪进行测定。该方法有机地将点击化学快速反应的优势与适配体高特异性的特点结合起来，采用简单便携的血糖仪进行数据采集，大大降低了操作的复杂性和检测成本，提高了灵敏度和选择性。

主权项

一种便携快速检测赭曲霉毒素A的方法，特征在于：具体步骤如下：（1）、按照参考文献（Xiang, Y.; Lu, Y.; Using personal glucose meters and functional DNA sensors to quantify a variety of analytical targets, Nature Chemistry, 2011, 3, 697‑703.），采用巯基‑端炔修饰DNA、磺基‑4‑(N‑马来酰亚胺甲基)环己烷‑1‑羧酸琥珀酰亚胺酯钠盐、蔗糖转化酶和三‑(2‑甲酰乙基)膦制备蔗糖转化酶‑端炔修饰DNA；（2）、将5.0 µL 0.05 µM的生物素‑叠氮修饰DNA 、10 µL 链霉素修饰的磁珠一起加入至25 µL PBS缓冲溶液中，PBS缓冲溶液的浓度为0.01 M，pH为7.3，在室温下震荡30分钟，促使生物素‑叠氮修饰DNA结合在磁珠表面；（3）、在步骤（2）反应结束后的PBS缓冲溶液中加入5.0 µL NaCl和不同浓度的赭曲霉毒素A，赭曲霉毒素A的浓度范围为0.2 ng/mL～50 ng/mL，在室温下震荡15分钟；反应结束后，采用磁铁进行第一次分离，弃去第一次上层清液，得到下层磁珠，并用PBS缓冲溶液清洗磁珠两次，清洗结束后在磁珠中加入50 µL PBS缓冲溶液混匀，得到含有结合在磁珠表面的叠氮修饰DNA‑赭曲霉毒素A溶液；（4）、取20 µL步骤（3）反应所得叠氮修饰DNA‑赭曲霉毒素A溶液，加入2.5 µL步骤（1）所得蔗糖转化酶‑端炔修饰DNA溶液、5.0 µL 0.1 mM CuSO₄溶液、5.0 µL 1.0 mM抗坏血酸溶液，在室温下培育10分钟，让抗坏血酸还原Cu(II)得到Cu(I)化合物，催化蔗糖转化酶‑端炔修饰DNA与磁珠表面的叠氮修饰DNA‑赭曲霉毒素A发生点击化学反应，得到蔗糖转化酶修饰磁珠溶液；（5）、步骤（4）反应结束后，对步骤（4）中所得到的蔗糖转化酶修饰磁珠溶液采用磁铁进行第二次分离，得到第二次上层清液；取10 µL第二次上层清液，加入至2.5 µL 2.0 M蔗糖溶液，在室温下反应20分钟，取3.0 µL溶液至血糖仪试纸上，采用血糖仪进行测量，绘制所测数值在不同赭曲霉毒素A浓度条件下的变化趋势图，根据该图就能检测赭曲霉毒素A的浓度。