[发明专利]一种便携快速检测赭曲霉毒素A的方法

权利要求书

1.一种便携快速检测赭曲霉毒素A的方法，特征在于：具体步骤如下：

（1）、按照参考文献（Xiang, Y.; Lu, Y.; Using personal glucose meters and functional DNA sensors to quantify a variety of analytical targets, Nature Chemistry, 2011, 3, 697-703.），采用巯基-端炔修饰DNA、磺基-4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯钠盐、蔗糖转化酶和三-(2-甲酰乙基)膦制备蔗糖转化酶-端炔修饰DNA；

（2）、将5.0 μL 0.05 μM的生物素-叠氮修饰DNA 、10 μL 链霉素修饰的磁珠一起加入至25 μL PBS缓冲溶液中，PBS缓冲溶液的浓度为0.01 M，pH为7.3，在室温下震荡30分钟，促使生物素-叠氮修饰DNA结合在磁珠表面；

（3）、在步骤（2）反应结束后的PBS缓冲溶液中加入5.0 μL NaCl和不同浓度的赭曲霉毒素A，赭曲霉毒素A的浓度范围为0.2 ng/mL～50 ng/mL，在室温下震荡15分钟；反应结束后，采用磁铁进行第一次分离，弃去第一次上层清液，得到下层磁珠，并用PBS缓冲溶液清洗磁珠两次，清洗结束后在磁珠中加入50 μL PBS缓冲溶液混匀，得到含有结合在磁珠表面的叠氮修饰DNA-赭曲霉毒素A溶液；

（4）、取20 μL步骤（3）反应所得叠氮修饰DNA-赭曲霉毒素A溶液，加入2.5 μL步骤（1）所得蔗糖转化酶-端炔修饰DNA溶液、5.0 μL 0.1 mM CuSO₄溶液、5.0 μL 1.0 mM抗坏血酸溶液，在室温下培育10分钟，让抗坏血酸还原Cu(II)得到Cu(I)化合物，催化蔗糖转化酶-端炔修饰DNA与磁珠表面的叠氮修饰DNA-赭曲霉毒素A发生点击化学反应，得到蔗糖转化酶修饰磁珠溶液；

（5）、步骤（4）反应结束后，对步骤（4）中所得到的蔗糖转化酶修饰磁珠溶液采用磁铁进行第二次分离，得到第二次上层清液；取10 μL第二次上层清液，加入至2.5 μL 2.0 M蔗糖溶液，在室温下反应20分钟，取3.0 μL溶液至血糖仪试纸上，采用血糖仪进行测量，绘制所测数值在不同赭曲霉毒素A浓度条件下的变化趋势图，根据该图就能检测赭曲霉毒素A的浓度。

2.根据权利要求1所述的便携快速检测赭曲霉毒素A的方法，特征在于：步骤（1）中所述的巯基-端炔修饰DNA序列从5’到3’端为： 5’-炔基- AAA AAA AAA AAA-巯基- 3’。

3.根据权利要求1所述的便携快速检测赭曲霉毒素A的方法，特征在于：步骤（2）中所述的生物素-叠氮修饰DNA序列从5’到3’端为：5’-生物素-GAT CGG GTG TGG GTG GCG TAA AGG GAG CAT CGG ACA-叠氮- 3’。