[发明专利]从含二硫化物的蛋白质制备缀合物的方法

摘要

本发明提供了从具有至少两个半胱氨酸的蛋白质制备蛋白质缀合物的方法。在一个实施方案中，还原具有二硫键的蛋白质，从而提供两个游离半胱氨酸，其用于与1,3-二卤代丙酮或类似的反应物反应，将两个半胱氨酸的硫原子连接在一起。然后利用插在硫原子之间的酮与胺化的有效载荷分子形成Schiff碱，从而将该蛋白质与有效载荷缀合。在另一实施方案中，通过与1,3-二卤代丙酮或类似反应物反应而将两个半胱氨酸残基连接在一起。硫原子之间的连接子在各情况中使蛋白质或肽保持在受约束的构象，同时还提供用于高特异性且高效连接有效载荷的方便的位点。

主权项

从包含至少两个半胱氨酸残基的蛋白质形成蛋白质‑有效载荷缀合物的方法，其中所述方法包括:a)在官能化的拴系化合物与所述蛋白质上的两个游离硫羟基反应，形成具有通过官能化的连接臂共价连接在一起的两个硫羟基的活化的蛋白质的条件下，使所述蛋白质与官能化的拴系化合物接触；和b)如果所述官能化的连接臂尚未与有效载荷连接，则使所述活化的蛋白质与官能化的有效载荷化合物接触，形成所述有效载荷与所述官能化的连接臂的共价连接，从而形成蛋白质‑有效载荷缀合物。