[发明专利]从含二硫化物的蛋白质制备缀合物的方法

权利要求书

1.从包含至少两个半胱氨酸残基的蛋白质形成蛋白质-有效载荷缀合物的方法，其中所述方法包括:

a)在官能化的拴系化合物与所述蛋白质上的两个游离硫羟基反应，形成具有通过官能化的连接臂共价连接在一起的两个硫羟基的活化的蛋白质的条件下，使所述蛋白质与官能化的拴系化合物接触；和

b)如果所述官能化的连接臂尚未与有效载荷连接，则使所述活化的蛋白质与官能化的有效载荷化合物接触，形成所述有效载荷与所述官能化的连接臂的共价连接，从而形成蛋白质-有效载荷缀合物。

2.权利要求1的方法，其中所述蛋白质在与官能化的拴系试剂接触之前，具有两个由二硫键连接在一起的半胱氨酸残基，并且其中所述二硫键被还原，提供用于权利要求1的步骤a)的具有两个游离半胱氨酸残基的蛋白质。

3.权利要求1或2的方法，其中所述官能化的拴系化合物是二卤代丙酮衍生物，并且所述官能化的连接臂是–CHR-C(＝Z)-CHR-，其中Z为O或NR’，并且每个R独立地为H、苯基、C1-C4烷氧基或C1-C4烷基，且R’代表与有效载荷连接的连接基团。

4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述官能化的有效载荷是式H₂N-O-L-PL或H₂N-NR’-L-PL的化合物，其中L表示连接基团；并且PL表示至少一个有效载荷分子。

5.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述官能化的有效载荷是式H₂N-O-L-PL化合物。

6.权利要求1的方法，其中所述活化的蛋白质包含具有下式的酮：

其中圆圈表示蛋白质，并且每一个硫原子是所述蛋白质的半胱氨酸残基的巯基。

7.前述任一项权利要求的方法，其中所述蛋白质-有效载荷缀合物包含下式基团：

其中X是O或NH，L表示连接体，并且PL表示至少一个有效载荷基团。

8.前述任一项权利要求的方法，其中所述蛋白质是抗体。

9.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述蛋白质是疫苗载体。

10.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述有效载荷包括治疗剂。

11.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述有效载荷包括可检测的标签或结合基团。

12.权利要求9的方法，其中所述有效载荷包括抗原。

13.权利要求8的方法，其中L包含可切割的连接部分。

14.权利要求1-13中任一项的方法，其中L包含至少一个氨基酸。