[发明专利]使用组合的核酸酶、连接和聚合酶反应用于核酸序列的相对定量、表达或拷贝变化的方法

摘要

本发明涉及用于鉴定参与核酸酶-连接反应的样本中一个或多个靶核苷酸序列的存在的方法。在一些实施方案中，使用聚合酶链式反应随后扩增在本发明的所述核酸酶-连接过程中形成的连接产物。检测所述连接的产物序列或其延伸产物，并且基于所述检测来鉴定所述样本中一个或多个靶核苷酸序列的存在。

主权项

一种用于鉴定样本中一个或多个靶核苷酸序列存在的方法，其包括：提供可能含有所述一个或多个靶核苷酸序列的样本；提供一个或多个寡核苷酸探针组，每组包含(a)具有靶特异性部分的第一寡核苷酸探针，和(b)具有靶特异性部分的第二寡核苷酸探针，其中探针组的所述第一和第二寡核苷酸探针被配置为在所述靶核苷酸序列上彼此相邻杂交，在所述第一和第二寡核苷酸探针之间形成接合，并且其中，在探针组中，所述第二寡核苷酸探针的所述靶特异性部分在所述接合处具有与所述第一寡核苷酸探针重叠的相同核苷酸；在使探针组的第一和第二寡核苷酸探针在相邻位置上以碱基特异性方式与其相应的靶核苷酸序列(如果存在于样本中)杂交有效的条件下，使所述样本和所述一个或多个寡核苷酸探针组接触，其中杂交后，在包含所述重叠的相同核苷酸的接合处所述第二寡核苷酸探针的所述重叠的相同核苷酸形成侧翼；用具有5’核酸酶活性的酶切割所述第二寡核苷酸探针的所述重叠的相同核苷酸，从而释放在所述第二寡核苷酸探针的5’末端的磷酸；将所述一个或多个寡核苷酸探针组的第一和第二寡核苷酸探针在所述接合处连接在一起以形成连接的产物序列；检测所述样本中的所述连接产物序列；和基于所述检测鉴定所述样本中一个或多个靶核苷酸序列的存在。