[发明专利]含有苹果油菜素甾醇信号转导途径负调控基因BKI1的植物表达载体的构建无效
| 申请号： | 201310670789.7 | 申请日： | 2013-12-07 |
| 公开（公告）号： | CN103642833A | 公开（公告）日： | 2014-03-19 |
| 发明（设计）人： | 马跃;何平;张志宏;李林光;王丰;张蕾;代红艳;李贺;刘月学 | 申请（专利权）人： | 沈阳农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/66;C12N15/29 |
| 代理公司： | 沈阳杰克知识产权代理有限公司 21207 | 代理人： | 金春华 |
| 地址： | 110866 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明涉及含有苹果油菜素甾醇信号转导途径负调控基因BKI1的植物表达载体的构建。所构建的植物表达载体pOX-BKI1是由苹果BKI1基因插入植物表达载体pRI101AN质粒进行重组反应得到。将该植物表达载体用于植物遗传转化，BKI1基因在CaMV35S启动子的启动下过量表达，阻断了油菜素甾醇的信号转导途径，对植物生长发育产生负调控作用，抑制了植物茎及主干的伸长，起矮化植株的作用。 | ||
| 搜索关键词： | 含有 苹果 油菜 素甾醇 信号 转导 途径 调控 基因 bki1 植物 表达 载体 构建 | ||
【主权项】：
含有苹果油菜素甾醇信号转导途径负调控基因BKI1的植物表达载体的构建，其特征在于方法如下：1)提取苹果叶片中的总RNA，然后将总RNA反转录成cDNA；2)以cDNA为模板，通过设计的特定引物，PCR扩增得到上游和下游分别引入NdeⅠ和EcoRⅠ酶切位点的BKI1基因；其中，所述的特定引物是：上游引物P1：5’‑CGCATATGGAGTCGTCGAGGACGAG‑3’；下游引物P2：5’‑GGGAATTCTCAAATCTCATGACTGACCA‑3’；3)将带有酶切位点的BKI1基因，连接到克隆载体pGM‑T上，转化TOP10感受态细胞，提取阳性质粒pGM‑BKI1；4)限制性内切酶NdeⅠ和EcoRⅠ分别对阳性质粒pGM‑BKI1和表达载体pRI101AN进行双酶切，将得到的BKI1基因片段插入到表达载体pRI101AN中，构建含有苹果油菜素甾醇信号转导途径负调控基因BKI1的植物表达载体pOX‑BKI1。
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