[发明专利]含有苹果油菜素甾醇信号转导途径负调控基因BKI1的植物表达载体的构建无效
| 申请号： | 201310670789.7 | 申请日： | 2013-12-07 |
| 公开（公告）号： | CN103642833A | 公开（公告）日： | 2014-03-19 |
| 发明（设计）人： | 马跃;何平;张志宏;李林光;王丰;张蕾;代红艳;李贺;刘月学 | 申请（专利权）人： | 沈阳农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/66;C12N15/29 |
| 代理公司： | 沈阳杰克知识产权代理有限公司 21207 | 代理人： | 金春华 |
| 地址： | 110866 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 含有 苹果 油菜 素甾醇 信号 转导 途径 调控 基因 bki1 植物 表达 载体 构建 | ||
1.含有苹果油菜素甾醇信号转导途径负调控基因BKI1的植物表达载体的构建，其特征在于方法如下：
1)提取苹果叶片中的总RNA，然后将总RNA反转录成cDNA；
2)以cDNA为模板，通过设计的特定引物，PCR扩增得到上游和下游分别引入NdeⅠ和EcoRⅠ酶切位点的BKI1基因；
其中，所述的特定引物是：
上游引物P1：5’-CGCATATGGAGTCGTCGAGGACGAG-3’；
下游引物P2：5’-GGGAATTCTCAAATCTCATGACTGACCA-3’；
3)将带有酶切位点的BKI1基因，连接到克隆载体pGM-T上，转化TOP10感受态细胞，提取阳性质粒pGM-BKI1；
4)限制性内切酶NdeⅠ和EcoRⅠ分别对阳性质粒pGM-BKI1和表达载体pRI101AN进行双酶切，将得到的BKI1基因片段插入到表达载体pRI101AN中，构建含有苹果油菜素甾醇信号转导途径负调控基因BKI1的植物表达载体pOX-BKI1。
2.如权利要求1所述的含有苹果油菜素甾醇信号转导途径负调控基因BKI1的植物表达载体的构建，其特征在于：所述的苹果油菜素甾醇信号转导途径负调控基因BKI1的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求1或2所述的含有苹果油菜素甾醇信号转导途径负调控基因BKI1的植物表达载体的构建，其特征在于：所述的苹果为“寒富”苹果。
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