[发明专利]一种水稻米糠脂肪酶提取、保存方法

摘要

本发明公开了一种水稻米糠脂肪酶提取、保存方法，主要是用去离子水或蒸馏水振荡法提取脂肪酶，其方法原理简单、快速，操作简便，较传统的磷酸缓冲液研磨提取法，所提取的脂肪酶比活力较高，纯度好。并且，所提取的脂肪酶利用pH7.0磷酸缓冲液保存，效果较好。本发明能广泛应用和商业化运作、生产。

主权项

一种水稻米糠脂肪酶提取、保存方法，其特征在于包括以下步骤：（1）米糠脱脂：取一定量的米糠置于具盖的密封容器中，按每1g米糠对应3ml正己烷的比例，加上相应的正己烷，混匀后，放置于能前后左右振荡的水平振荡器上，以170‑190r/min的振荡速率振荡25‑35min，进行脱脂后，再充分过滤，弃过滤液，将滤渣内米糠颗粒取出，放入开口容器中，常温下放置4‑8小时，每1小时搅拌3‑4次，使正己烷充分挥发，干燥待用；（2）脂肪酶提取：待脱脂后的米糠颗粒充分干燥后，称取一定量的脱脂米糠置于具盖的密封容器中，按每1g米糠对应8ml去离子水或蒸馏水的比例，加上相应的去离子水或蒸馏水，并置于能前后左右振荡的水平振荡器上，以170‑190r/min的振荡速率振荡25‑35min，再2‑6℃、2000‑4000rpm/min冷冻离心25‑35min后，取上清液至另一容器中保存，即为粗酶提取液；（3）脂肪酶比活力测定：粗酶液酶活力测定按照ZL200610097523.8的方法进行；粗酶液蛋白含量测定按蛋白质浓度测定的紫外吸收法进行；最后根据酶总活力/蛋白含量的比值，计算脂肪酶比活力；（4）米糠脂肪酶保存：将粗酶提取液制成冷干粉，或利用50 mM pH 7.0磷酸缓冲液进行保存。