[发明专利]一种水稻米糠脂肪酶提取、保存方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种水稻米糠脂肪酶的提取、保存方法，具体是以稻谷加工的副产品米糠为源材料，研制新的米糠脂肪酶提取、保存方法。

背景技术

水稻是世界上最重要的粮食作物之一。我国是世界上最大的稻米生产国，稻谷产量占世界总产量的37 %左右，年产稻谷1.9 亿吨以上。作为稻谷脱壳后精碾糙米时的副产物———米糠约占稻谷的6 %～12 %，如以6 %计算，则我国米糠年产量达1000万吨以上,米糠资源十分丰富。米糠由于含有优质丰富的蛋白质、脂肪、维生素以及水溶性米糠多糖,在食品、医药、保健、饲料等方面具有巨大的开发利用价值。联合国工业发展组织(UNIDO) 把米糠称为一种未充分利用的原料(an under-utilized raw material) 。

脂肪酶( triacylglycerol lipase EC3.1.1.3) 是广泛存在于动植物和微生物中的一种酶, 在脂质代谢中发挥重要的作用。在油水界面上,脂肪酶催化三酰甘油的酯键水解, 释放含更少酯键的甘油酯或甘油及脂肪酸。除此之外,还有多种酶活性, 如催化多种酯的水解、合成及外消旋混合物的拆分。脂肪酶反应条件温和, 具有优良的立体选择性, 并且不会造成环境污染, 因此, 在食品、皮革、医药、饲料和洗涤剂等许多工业领域中均有广泛的应用。

水稻的种皮、糊粉层和种胚等米糠成分中则含有丰富的脂肪酶。

发明内容

基于水稻米糠中均含有较多脂肪酶。本发明以稻谷加工的副产品米糠为源材料，提供了一种水稻米糠脂肪酶提取、保存方法，其方法原理简单、快速、成本低，所提取的脂肪酶纯度高且易于保存，能广泛应用和商业化运作、生产。

本发明的技术方案为：

一种水稻米糠脂肪酶提取、保存方法，其特征在于：

（1）米糠脱脂：取一定量的米糠置于具盖的密封容器中，按每1g米糠对应3ml正己烷的比例，加上相应的正己烷，混匀后， 放置于能前后左右振荡的水平振荡器上，以170-190r/min的振荡速率振荡25-35min，进行脱脂后，再充分过滤，弃过滤液，将滤渣内米糠颗粒取出，放入开口容器中，常温下放置4-8小时，每1小时搅拌3-4次，使正己烷充分挥发，干燥待用；

（2）脂肪酶提取：待脱脂后的米糠颗粒充分干燥后，称取一定量的脱脂米糠置于具盖的密封容器中，按每1g米糠对应8ml去离子水或蒸馏水的比例，加上相应的去离子水或蒸馏水，并置于能前后左右振荡的水平振荡器上，以170-190r/min的振荡速率振荡25-35min，再2-6℃、2000-4000rpm/min冷冻离心25-35min后，取上清液至另一容器中保存，即为粗酶提取液；

（3）脂肪酶比活力测定：粗酶液酶活力测定按照ZL200610097523.8的方法进行；粗酶液蛋白含量测定按（李建武等编，生物化学实验原理和方法，北京：北京大学出版社，1994.9）蛋白质浓度测定的紫外吸收法进行；最后根据酶总活力/蛋白含量的比值，计算脂肪酶比活力；

（4）米糠脂肪酶保存：将粗酶提取液制成冷干粉，或利用50 mM pH7.0磷酸缓冲液（包含0.5mM 氯化钙）进行保存。

本发明的有益效果：

本发明一种水稻米糠脂肪酶提取、保存方法，主要是用去离子水或蒸馏水振荡法提取脂肪酶，其方法原理简单、快速，操作简便，较传统的磷酸缓冲液研磨提取法，所提取的脂肪酶比活力较高，纯度好。所提取的脂肪酶利用pH7.0磷酸缓冲液保存，效果较好。本发明能广泛应用和商业化运作、生产。

附图说明

图1为不同提取液不同振荡时间的蛋白质浓度差异图。

图2为不同提取液不同振荡时间的脂肪酶酶活变化图。

图3 为不同提取液不同振荡时间的脂肪酶比活力差异图。

图4为不同保存液室温条件下保存的脂肪酶活性变化图。

具体实施方式

（1）米糠脱脂：取待处理的新鲜米糠10g置于50ml具盖的离心管中，加上30ml正己烷，混匀后， 放置于STS-3型脱色摇床（上海琪特分析仪器有限公司）170-190r/min振荡30min脱脂。用滤纸充分过滤，弃过滤液，将滤纸内米糠颗粒取出，放入开口的试管或离心管中，室温下放置4-8小时，每1小时搅拌3次，使正己烷充分挥发，干燥待用；