[发明专利]一种抗肿瘤基因磁性复合纳米颗粒及制备方法

摘要

本发明是一种抗肿瘤基因磁性复合纳米颗粒及制备方法，通过PCR扩增得到Egr1和Hsp70启动子及HSVTK基因，经酶切、连接等步骤连接至pCDNA3.1质粒中，并以磁性纳米粒为基因载体将构建的基因导入HEK293细胞，定量观察在辐射、磁热疗或二者共同诱导后HSV-TK基因的表达。该质粒的Egr1启动子在2GyＸ射线诱导后６小时后，靶基因的表达量最高。Egr1和Hsp70启动子都具有诱导表达活性，可在辐射和热激分别及联合作用下诱导目的基因的表达，且联合作用时对基因诱导表达的能力更强，为进一步进行癌症的综合治疗提供了实验依据。

主权项

一种抗肿瘤基因磁性复合纳米颗粒的制备方法，其特征在于，该方法包括下述步骤：1）以pIRES‑CMVE‑Egr1p真核表达质粒为模板，进行聚合酶链式反应，得到辐射诱导启动子片段，将其亚克隆至pCDNA3.1‑EGFP质粒上，得到pCDNA3.1‑Egr1‑EGFP真核表达质粒；2）以载有热启动子和自杀基因的质粒为模板，进行聚合酶链式反应，得到热启动子片段和抗肿瘤基因片段；3）将抗肿瘤基因片段亚克隆至所述步骤1）中得到的pCDNA3.1‑Egr1‑EGFP真核表达质粒中，取代EGFP，得到pCDNA3.1‑Egr1‑ HSV‑TK真核表达质粒；4）将热启动子片段亚克隆至所述pCDNA3.1‑Egr1‑HSV‑TK真核表达质粒上，得到pCDNA3.1‑Egr1‑ Hsp70‑ HSV‑TK真核表达质粒； 5）按多聚乙烯亚胺负载的Mn0.5Zn0.5Fe2O4纳米粒与pCDNA3.1‑Egr1‑Hsp70‑ HSV‑TK真核表达质粒质量比为20：1~50：1，将二者分别用无血清培养基稀释，室温放置5分钟以上，然后将二者的稀释溶液混和均匀，室温下孵育30分钟以上，获得pEgr1‑Hsp70‑HSV‑TK/PEI‑MZF‑NPs复合物，即为抗肿瘤基因磁性复合纳米颗粒。