[发明专利]从大兴安岭野生牧马豆中高效提取总生物碱的新方法

摘要

发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生牧马豆里提取、纯化总生物碱的方法，特别是涉及一种采用生物酶解技术，超高压藕联亚临界水提取，酶法分离精制再采用高速逆流色谱法分离纯化，最终得到高纯度总生物碱的方法。本发明优点：1、生物破壁技术使生物碱有效成分快速溶出，保持高活性。在常温下进行，能耗低，可进行工业化生产。2、亚临界水无毒、无污染，使提取物的活性不被破坏；运行成本低，易于和产物分离，可进行工业化大规模生产。3、高速逆流色谱技术具有操作灵活、高效、分离速度快、制备量大、费用低等优点，并且可以工业化使用。本发明利用上述技术所得总生物碱含量高，纯度高达95.8％。

主权项

一种采用生物酶解技术，超高压藕联亚临界水提取，酶法分离精制再采用高速逆流色谱法分离纯化，最终得到高纯度总生物碱的方法，其步骤如下：(1)生物破壁：牧马豆种子加入果胶酶与纤维素酶、半纤维素素酶混合酶解，在一定酶浓度，PH值3‑4，酶解时间2‑3h；(2)超高压提取：按一定料液比加入加入亚临界水，以适当压力、时间加压两次；(3)酶法分离精制：提取液添加一定量的木瓜蛋白酶和淀粉酶，将提取液中的蛋白质、淀粉降解为小分子物质除去，改善水提取液的过滤难问题，提高澄清度和纯度；(4)微滤：粗提液用适当的微孔膜过滤，膜压力0.2‑0.4MPa，过滤温度50‑60℃；(5)结晶：过滤后液体初步浓缩，浓缩粉按一定的量加盐酸溶液，加氨水调至中性，加热溶解，浓缩后放置过夜，析出结晶，过滤，分离晶体；(6)分相：称取总生物碱提取物，选择HSCCC溶剂系统，按比例将各种溶剂加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜。分相平衡后分出上相和下相；(7)HSCCC纯化：以溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，调整转速，以一定流速泵入流动相，纯化总生物碱提取物；(8)检测：采用高效液相色谱法，紫外检测器在一定波长进行检测，得纯度为90％以上的总生物碱。