[发明专利]从大兴安岭野生牧马豆中高效提取总生物碱的新方法

权利要求书

1.一种采用生物酶解技术，超高压藕联亚临界水提取，酶法分离精制再采用高速逆流色谱法分离纯化，最终得到高纯度总生物碱的方法，其步骤如下：

(1)生物破壁：牧马豆种子加入果胶酶与纤维素酶、半纤维素素酶混合酶解，在一定酶浓度，PH值3-4，酶解时间2-3h；

(2)超高压提取：按一定料液比加入加入亚临界水，以适当压力、时间加压两次；

(3)酶法分离精制：提取液添加一定量的木瓜蛋白酶和淀粉酶，将提取液中的蛋白质、淀粉降解为小分子物质除去，改善水提取液的过滤难问题，提高澄清度和纯度；

(4)微滤：粗提液用适当的微孔膜过滤，膜压力0.2-0.4MPa，过滤温度50-60℃；

(5)结晶：过滤后液体初步浓缩，浓缩粉按一定的量加盐酸溶液，加氨水调至中性，加热溶解，浓缩后放置过夜，析出结晶，过滤，分离晶体；

(6)分相：称取总生物碱提取物，选择HSCCC溶剂系统，按比例将各种溶剂加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜。分相平衡后分出上相和下相；

(7)HSCCC纯化：以溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，调整转速，以一定流速泵入流动相，纯化总生物碱提取物；

(8)检测：采用高效液相色谱法，紫外检测器在一定波长进行检测，得纯度为90％以上的总生物碱。

2.根据权利要求1所述的一种采用生物酶解技术，超高压藕联亚临界水提取，酶法分离精制再采用高速逆流色谱法分离纯化，最终得到高纯度总生物碱的方法，其特征是：在所述的步骤(1)中，果胶酶与纤维素酶、半纤维素素酶比例为1：1：1、1：2：1、1：2：2，酶浓度为0.3-0.5g／kg，酶解温度40-50(。

3.根据权利要求2所述的一种采用生物酶解技术，超高压藕联亚临界水提取，酶法分离精制再采用高速逆流色谱法分离纯化，最终得到高纯度总生物碱的方法，其特征是：在所述的步骤(2)中，料液比为1：8-12，超高压力为200-400MPa，加压时间5-8min。

4.根据权利要求3所述的一种采用生物酶解技术，超高压藕联亚临界水提取，酶法分离精制再采用高速逆流色谱法分离纯化，最终得到高纯度总生物碱的方法，其特征是：在所述的步骤(3)中，木瓜蛋白酶和淀粉酶比例为1：1、2：1、1：2，添加量为1.0-1.5‰。

5.根据权利要求4所述的一种采用生物酶解技术，超高压藕联亚临界水提取，酶法分离精制再采用高速逆流色谱法分离纯化，最终得到高纯度总生物碱的方法，其特征是：在所述的步骤(4)中，微孔过滤膜为0.5-0.8um。

6.根据权利要求5所述的一种采用生物酶解技术，超高压藕联亚临界水提取，酶法分离精制再采用高速逆流色谱法分离纯化，最终得到高纯度总生物碱的方法，其特征是：在所述的步骤(6)中，HSCCC溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(4：2：3：1)、氯仿-甲醇-水(4：3：2)、正丁醇-乙酸乙酯-水(5：4：2)中的任意一种。

7.根据权利要求6所述的一种采用生物酶解技术，超高压藕联亚临界水提取，酶法分离精制再采用高速逆流色谱法分离纯化，最终得到高纯度总生物碱的方法，其特征是：在所述的步骤(7)中，转速700-900r／min，流动相流速为2.0-3.0mL／min。