[发明专利]从大兴安岭野生牧马豆中高效提取总生物碱的新方法

说明书

技术领域：

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生牧马豆里提取总生物碱的新方法，特别是涉及一种利用超高压藕联亚临界水提取，高速逆流色谱分离纯化总生物碱的新方法。

背景技术：

牧马豆，别名披针叶黄华。多年生草本，高10～40厘米，全株无毛。根茎细长，淡黄褐色，具少数须根。茎直立，稍分枝，表面有细纵纹。3出复叶，互生；小叶片倒卵状长圆形或倒披针形，长2.5～8.5厘米，宽7～20毫米，先端急尖，基部楔形，上面平滑，下面密生平伏短柔毛；托叶2，对生，基部连合，总状花序顶生；苞片3，基部连合；花长约3厘米；萼筒状，长约1.6厘米；花冠蝶形，黄色。荚果条形，长5～9厘米，宽7～12毫米。种子肾形，黑褐色，有光泽。花期6～7月。果期7～8月。种子含生物碱达5％，主要成分为金雀花碱，其次为黄华碱、鹰爪豆碱、臭豆碱。生物碱具有一定营养和药理作用，在食品、化妆、医药等方面有着巨大的应用潜力。

国内一般用有机溶剂提取法提取生物碱，常用的有冷浸、渗漉、索氏提取、热回流提取。有机溶剂提取需要几小时至十几小时，操作温度高且得率低，能耗大。

本发明的不同之处在于主要采用生物酶解技术，超高压藕联亚临界水提取，酶法分离精制，后期采用高速逆流色谱法分离纯化总生物碱。产品不仅得率高，而且纯度高。亚临界水的极性在较大范围内变化，可以实现天然产物中有效成分的连续提取，并可实现选择性提取；且动态亚临界水装置结构简单，可以根据实验要求进行不同的改进。

发明内容：

本发明的目的在于克服常规技术提取率较低、提取纯度低等缺点，提供一种主要采用生物酶解技术，超高压藕联亚临界水提取，后期采用高速逆流色谱法(HSCCC)分离纯化总生物碱的方法。

本发明方法提取快捷、产品纯度高。本发明优点：大大提高了生物碱萃取速度，同时极大提高有效成分含量，克服了常规提取提取物纯度低、得率低的缺点。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种采用生物酶解技术，超高压藕联亚临界水提取，酶法分离精制再采用高速逆流色谱法分离纯化，最终得到高纯度总生物碱的方法，其步骤如下：

(1)生物破壁：牧马豆种子加入果胶酶与纤维素酶、半纤维素素酶混合酶解，在一定酶浓度，PH值3-4，酶解时间2-3h；

(2)超高压提取：按一定料液比加入加入亚临界水，以适当压力、时间加压两次；

(3)酶法分离精制：提取液添加一定量的木瓜蛋白酶和淀粉酶，将提取液中的蛋白质、淀粉降解为小分子物质除去，改善水提取液的过滤难问题，提高澄清度和纯度；

(4)微滤：粗提液用适当的微孔膜过滤，膜压力0.2-0.4MPa，过滤温度50-60℃；

(5)结晶：

过滤后液体初步浓缩，浓缩粉按一定的量加盐酸溶液，加氨水调至中性，加热溶解，浓缩后，放置过夜，析出结晶，过滤，分离晶体；

(6)分相：称取总生物碱提取物，选择HSCCC溶剂系统，按比例将各种溶剂加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜。分相平衡后分出上相和下相；

(7)HSCCC纯化：以溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，调整转速，以一定流速泵入流动相，纯化总生物碱提取物；

(8)检测：采用高效液相色谱法，紫外检测器在一定波长进行检测，得纯度为90％以上的总生物碱。

具体实施方式：

实施例1：一种采用生物酶解技术，超高压藕联亚临界水提取，酶法分离精制再采用高速逆流色谱法分离纯化，最终得到高纯度总生物碱的方法，其步骤如下：

(1)生物破壁：2kg牧马豆种子加入果胶酶与纤维素酶、半纤维素素酶(1：1：1)混合酶解，酶浓度为0.3g／kg，调整pH值为3，40℃下酶解时间2h；

(2)超高压提取：加入亚临界水，按1：8料液比加入，以200MPa压力加压5min，加压两次；

(3)酶法分离精制：提取液添加木瓜蛋白酶和淀粉酶(1：1)，添加量1‰，将提取液中的蛋白质、淀粉降解为小分子物质除去，提高提取液的澄清度和纯度；

(4)微滤：将初步分离液用0.8um微孔过滤，压力0.2MPa，过滤温度50℃；

(5)结晶：

过滤后液体初步浓缩，浓缩粉加1％盐酸溶液，加氨水调至中性，加热溶解，浓缩后放置过夜，析出结晶，过滤，分离得到晶体79.7g；