[发明专利]一种医疗检测用高纯度甲状旁腺激素的制备方法无效
| 申请号： | 201310587116.5 | 申请日： | 2013-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN103614441A | 公开（公告）日： | 2014-03-05 |
| 发明（设计）人： | 蔺宗;姚玲;刘金刚;王蓉 | 申请（专利权）人： | 浙江清华长三角研究院 |
| 主分类号： | C12P21/02 | 分类号： | C12P21/02;C07K1/18;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州九洲专利事务所有限公司 33101 | 代理人： | 翁霁明 |
| 地址： | 314006 浙江省嘉兴*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 一种医疗检测用高纯度甲状旁腺激素的制备方法,它包括以下步骤:A)利用基因工程技术构建含有PTH1-84基因序列的质粒载体，将该载体转化到大肠杆菌感受态中；B）挑取单菌落加入到LB培养基中扩大培养，加入氨苄青霉素，使终浓度达到45-55ug/ml；35-40℃，200-250rpm培养至OD600=0.4-0.8后加入IPTG诱导，诱导5-9小时后，离心收集菌体，8000-9000rpm，12-18min，-70—-90℃冰箱冷冻；C)菌体沉淀用20mM pH5.7的PB缓冲液重悬，重悬的菌液置冰上超声破碎；D）破碎好的菌液10000-15000rpm，3-5℃，离心0.8-1.2h，收集上清，上清用已经稀释过的甲酸进行酸处理后，10000-15000rpm，3-5℃，离心0.8-1.2h；收集好的上清用0.22um的微孔膜过滤一次，准备过强阴离子柱；E)Buffer A为20mM pH4.8的PB缓冲液，Buffer B由Buffer A加入1M/L的NaCl组成，洗脱时Buffer B的浓度范围为0-100%，洗脱流速为0.8-1.2ml/min，洗脱时间4-8h，收集具有活性的高盐洗脱峰。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 医疗 检测 纯度 甲状旁腺 激素 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种医疗检测用高纯度甲状旁腺激素的制备方法,其特征在于该制备方法包括以下步骤:A)利用基因工程技术构建含有PTH1‑84基因序列的质粒载体，将该载体转化到大肠杆菌感受态中；B）挑取单菌落加入到LB培养基中扩大培养，加入氨苄青霉素，使终浓度达到45‑55ug/ml；35‑40℃，200‑250rpm培养至OD600=0.4‑0.8后加入IPTG诱导，诱导5‑9小时后，离心收集菌体，8000‑9000rpm，12‑18min，‑70—‑90℃冰箱冷冻；C)菌体沉淀用20mM pH5.7的PB缓冲液重悬，重悬的菌液置冰上超声破碎；D）破碎好的菌液10000‑15000rpm，3‑5℃，离心0.8‑1.2h，收集上清，上清用已经稀释过的甲酸进行酸处理后，10000‑15000rpm，3‑5℃，离心0.8‑1.2h；收集好的上清用0.22um的微孔膜过滤一次，准备过强阴离子柱；E)Buffer A为20mM pH4.8的PB缓冲液，Buffer B由Buffer A加入1M/L的NaCl组成，洗脱时Buffer B的浓度范围为0‑100%，洗脱流速为0.8‑1.2ml/min，洗脱时间4‑8h，收集具有活性的高盐洗脱峰。
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