[发明专利]一种土壤样品中微生物总DNA的提取方法在审
| 申请号： | 201310587102.3 | 申请日： | 2013-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN104651350A | 公开（公告）日： | 2015-05-27 |
| 发明（设计）人： | 许科伟;赵克斌;任春;黄欣;汤玉平;杨帆;蒋涛 | 申请（专利权）人： | 中国石油化工股份有限公司;中国石油化工股份有限公司石油勘探开发研究院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京聿宏知识产权代理有限公司 11372 | 代理人： | 吴大建;刘华联 |
| 地址： | 100728 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种土壤样品中微生物总DNA的提取方法；具体为：向土壤样品中加入DNA提取缓冲液，在液氮和热水浴中反复冻融；再加入蛋白酶K，37℃水浴30min；加入十二烷基磺酸钠溶液，65℃水浴30min，离心弃沉淀，收集上清液；用苯酚、氯仿和异戊醇的混合液抽提，离心后收集上清液，再倒入氯仿和异戊醇的混合液抽提，离心后收集上清液；在所述上清液中加入异丙醇对其沉淀，离心后收集沉淀；加入乙醇洗涤室温干燥后，加入TE缓冲液溶解。最后将上述DNA粗提液采用吸附柱纯化后分装、保存于-20℃。本发明方法对于深层土壤、干燥砂土等生物量少的样品以及粘性土壤尤为有效，所得的DNA提取液可直接用于后续分子生物学检测。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 土壤 样品 微生物 dna 提取 方法 | ||
【主权项】：
一种土壤样品中微生物总DNA的提取方法，包括：步骤A，在土壤样品中加入DNA提取缓冲液后，对土壤样品中的微生物进行物理法细胞破碎；步骤B，然后使用蛋白酶K溶液对步骤A得到的土壤样品中的微生物进行酶法细胞破碎；步骤C，再对步骤B得到的土壤样品中的微生物进行化学法细胞破碎后，将所得溶液离心并收集上清液；步骤D，用有机溶剂对所述上清液进行抽提后离心并收集上清液；在所述上清液中加入沉淀剂进行沉淀，离心并收集沉淀；然后将所述沉淀洗涤并干燥和溶解后，得到DNA粗提液；步骤E，将所述DNA粗提液采用吸附柱纯化后得到纯化的DNA提取液。
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