[发明专利]一种土壤样品中微生物总DNA的提取方法

权利要求书

1.一种土壤样品中微生物总DNA的提取方法，包括：

步骤A，在土壤样品中加入DNA提取缓冲液后，对土壤样品中的微生物进行物理法细胞破碎；

步骤B，然后使用蛋白酶K溶液对步骤A得到的土壤样品中的微生物进行酶法细胞破碎；

步骤C，再对步骤B得到的土壤样品中的微生物进行化学法细胞破碎后，将所得溶液离心并收集上清液；

步骤D，用有机溶剂对所述上清液进行抽提后离心并收集上清液；在所述上清液中加入沉淀剂进行沉淀，离心并收集沉淀；然后将所述沉淀洗涤并干燥和溶解后，得到DNA粗提液；

步骤E，将所述DNA粗提液采用吸附柱纯化后得到纯化的DNA提取液。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤A中所述物理法细胞破碎为对其冻融2～5次；步骤B中酶法细胞破碎的水浴温度为30～45℃；步骤C中所述化学法细胞破碎为使用表面活性剂进行细胞破碎；优选所述表面活性剂为十二烷基磺酸钠溶液，且化学破碎的温度为60～70℃。

3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤D中对所述上清液用有机溶剂抽提包括先对所述上清液用苯酚、氯仿和异戊醇的混合液抽提，离心并收集上清液；再用氯仿和异戊醇的混合液抽提，离心并收集上清液；且所述沉淀剂为异丙醇。

4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤D中使用乙醇水溶液洗涤所述沉淀，且使用TE缓冲液溶解所述沉淀。

5.根据权利要求1～4中任意一项所述的提取方法，其特征在于，步骤A中所述DNA提取缓冲液中包含50～150mM的Tris-HCl、50～150mM的EDTA、50～150mM磷酸盐缓冲液和0.5～2.5M的NaCl；优选其中还包括0.5～2wt%的CTAB。

6.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，步骤A所述冻融中的冷冻是在液氮环境下进行，而溶解是在60～70℃的水浴环境下进行。

7.根据权利要求1～6中任意一所述的提取方法，其特征在于，所述DNA提取缓冲液与所述土壤样品的质量比为1∶1～2∶1。

8.根据权利要求1～6中任意一所述的提取方法，其特征在于，所述吸附柱采用硅胶膜作为填料。

9.根据权利要求1～8中任意一项所述的提取方法，其特征在于，所述土壤样品为油气田土壤样品。

10.一种如权利要求1～9中任意一项所述的提取方法在油气勘探开发领域的应用。