[发明专利]用于检测革兰阴性杆菌常见碳青霉烯酶基因的LAMP引物、试剂盒及其检测方法

摘要

本发明公开了用于检测革兰阴性杆菌常见碳青霉烯酶基因的LAMP引物、试剂盒及其检测方法。本发明LAMP引物中，KPC和NDM引物组可检测到除NDM-10以外的所有亚型，IMP和VIM引物组可检测到国内外常见亚型。本发明建立的LAMP试剂盒用于联合检测KPC、NDM、IMP和VIM基因，可涵盖非发酵菌和肠杆菌科细菌常见的碳青霉烯酶基因，可准确快速的进行常见碳青霉烯酶基因的筛查，对于及时发现并进一步控制碳青霉烯酶基因在肠杆菌科细菌中传播导致的暴发流行具有重大的临床意义。本发明试剂盒检测灵敏度高，KPC、NDM、IMP和VIM基因的最低检测极限均可达到100CFU/反应。

主权项

 用于检测革兰阴性杆菌常见碳青霉烯酶基因的LAMP引物，包括KPC引物组、NDM引物组、IMP引物组和VIM引物组，其核苷酸序列分别如下所示：1) KPC引物组： 外引物：KF3：GTATCGCCGTCTAGTTCTG（SEQ ID NO.1），KB3：TGAATGAGCTGCACAGTG（SEQ ID NO.2）；内引物：KFIP：AATGGTTCCGCGACGAGGCTGTCTTGTCTCTCATGGC（SEQ ID NO.3），KBIP：GGACTTTGGCGGCTCCATGCGCGGTAACTTACAGTT（SEQ ID NO.4）；环引物：KLoopF：GGCAGAAAAGCCAGCCAG（SEQ ID NO.5），KLoopB：CGATGGATACCGGCTCAG（SEQ ID NO.6）；2) NDM引物组： 外引物：NF3：AACACAGCCTGACTTTCG（SEQ ID NO.7），NB3：GCTCATCACGATCATGCT（SEQ ID NO.8）；内引物：NFIP：ATGTCGGTGCCGTCGATCCCCGCTCAAGGTATTTTACC（SEQ ID NO.9），NBIP：GCTTTTGGTGGCTGCCTGATCACCGAGATTGCCGAG（SEQ ID NO.10）；环引物：NLoopF：GATATTGTCACTGGTGTGGC（SEQ ID NO.11），NLoopB：GGACAGCAAGGCCAAGTC（SEQ ID NO.12）；3) IMP引物组： 外引物：IF3：GGGCGTTGTTCCTAAACA（SEQ ID NO.13），IB3：GCTTGAACCTTACCGTCTT（SEQ ID NO.14）；内引物：IFIP：ACGTTCCACAAACCAAGTGACTGGTTGTTCTTGTAGATGCTGA（SEQ ID NO.15），IBIP：CAGCACGGGCGGAATAGAGGCTCATTAGTTAATTCAGACGC（SEQ ID NO.16）；环引物：ILoopF：TTAGCCGTAAATGGAGTGTCAA（SEQ ID NO.17），ILoopB：TGGCTTAATTCTCAATCCATCC（SEQ ID NO.18）；4) VIM引物组： 外引物：VF3：CTTCGGTCCAGTAGAACTCT（SEQ ID NO.19），VB3：GTGTGCTTGAGCAAGTCT（SEQ ID NO.20）；内引物：VFIP：TCGCACAACCACCATAGAGCGCATTCGACCGACAACTT（SEQ ID NO.21），VBIP：GTTGTCACGCACGTCTGCGAATCCGCTCAATGGAGG（SEQ ID NO.22）；环引物：VLoopF：GACGGGACGTACACAACT（SEQ ID NO.23），VLoopB：GATGCCGATCTGGCTGAA（SEQ ID NO.24）。