[发明专利]用于检测革兰阴性杆菌常见碳青霉烯酶基因的LAMP引物、试剂盒及其检测方法

权利要求书

1. 用于检测革兰阴性杆菌常见碳青霉烯酶基因的LAMP引物，包括KPC引物组、NDM引物组、IMP引物组和VIM引物组，其核苷酸序列分别如下所示：

1) KPC引物组： 

外引物：

KF3：GTATCGCCGTCTAGTTCTG（SEQ ID NO.1），

KB3：TGAATGAGCTGCACAGTG（SEQ ID NO.2）；

内引物：

KFIP：AATGGTTCCGCGACGAGGCTGTCTTGTCTCTCATGGC（SEQ ID NO.3），

KBIP：GGACTTTGGCGGCTCCATGCGCGGTAACTTACAGTT（SEQ ID NO.4）；

环引物：

KLoopF：GGCAGAAAAGCCAGCCAG（SEQ ID NO.5），

KLoopB：CGATGGATACCGGCTCAG（SEQ ID NO.6）；

2) NDM引物组： 

外引物：

NF3：AACACAGCCTGACTTTCG（SEQ ID NO.7），

NB3：GCTCATCACGATCATGCT（SEQ ID NO.8）；

内引物：

NFIP：ATGTCGGTGCCGTCGATCCCCGCTCAAGGTATTTTACC（SEQ ID NO.9），

NBIP：GCTTTTGGTGGCTGCCTGATCACCGAGATTGCCGAG（SEQ ID NO.10）；

环引物：

NLoopF：GATATTGTCACTGGTGTGGC（SEQ ID NO.11），

NLoopB：GGACAGCAAGGCCAAGTC（SEQ ID NO.12）；

3) IMP引物组： 

外引物：

IF3：GGGCGTTGTTCCTAAACA（SEQ ID NO.13），

IB3：GCTTGAACCTTACCGTCTT（SEQ ID NO.14）；

内引物：

IFIP：ACGTTCCACAAACCAAGTGACTGGTTGTTCTTGTAGATGCTGA（SEQ ID NO.15），

IBIP：CAGCACGGGCGGAATAGAGGCTCATTAGTTAATTCAGACGC（SEQ ID NO.16）；

环引物：

ILoopF：TTAGCCGTAAATGGAGTGTCAA（SEQ ID NO.17），

ILoopB：TGGCTTAATTCTCAATCCATCC（SEQ ID NO.18）；

4) VIM引物组： 

外引物：

VF3：CTTCGGTCCAGTAGAACTCT（SEQ ID NO.19），

VB3：GTGTGCTTGAGCAAGTCT（SEQ ID NO.20）；

内引物：

VFIP：TCGCACAACCACCATAGAGCGCATTCGACCGACAACTT（SEQ ID NO.21），

VBIP：GTTGTCACGCACGTCTGCGAATCCGCTCAATGGAGG（SEQ ID NO.22）；

环引物：

VLoopF：GACGGGACGTACACAACT（SEQ ID NO.23），

VLoopB：GATGCCGATCTGGCTGAA（SEQ ID NO.24）。

2. 用于检测革兰阴性杆菌常见碳青霉烯酶基因的LAMP试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括权利要求1所述的LAMP引物。

3. 根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括以下组份：（1）权利要求1所述的LAMP引物；（2）2×反应缓冲液；（3）DNA Bst聚合酶；（4）荧光指示剂或显色剂；（5）阳性对照；（6）阴性对照。

4. 根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：2×反应缓冲液包括：40mM Tris-HCl（pH 8.8），20mM KCl，16mM MgSO₄，20mM (NH₄)₂SO₄，0.2v/v% Tween-20，0.8M甜菜碱，2.8mM dNTPs。