[发明专利]一种原核基因工程杂合阳离子抗菌肽CC的获得及其发酵方法

摘要

本发明公开了一种重组杂合阳离子抗菌肽CC的大肠杆菌基因工程菌的获得方法。本发明的原理为，通过生物信息学与分子生物学技术相结合的方法，选取有医疗潜力的天然抗菌肽，进行抗菌肽的分子设计，翻译后合成基因序列，经过克隆载体构建、表达载体构建等技术程序构建杂合抗菌肽CC大肠杆菌基因工程菌。通过在GST标签与抗菌肽之间设置DPP三肽序列，表达后进行纯化。通过乳糖诱导代替IPTG诱导转化来降低成本，优化培养条件和培养基组成，与发酵相结合。对其进行的生物学活性鉴定结果表明，其高效的抗菌活性、对热和pH稳定以及极微弱的溶血活性使其在食品、饲料以及养殖业上具有广阔的应用前景。

主权项

1.一种原核基因工程杂合阳离子抗菌肽CC，其特征是，所述抗菌肽CC包括两对引物，其核苷酸序列如序列表序列3-6所示；所述抗菌肽CC是由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的抗菌肽；所述抗菌肽CC的核苷酸序列如序列表中序列1所示或如下序列所示；CGCGATCCGCCGGGTTGGCTGAAAAAACTGGGCAAGCTGAAGGCCCATAAGGCCACCATCCAAACCACTGGCGCCGCCCAACAAGCCGCCAACGTTGCCGCCACCCTGAAGGGTGCA其中，序列前端加入了DPP三肽序列的密码子，所述DPP三肽序列的密码子为波浪线部分；两端各加入了BamH I和Sal I限制性内切酶位点和保护性碱基，所述BamH I和Sal I限制性内切酶位点为方框内的部分，所述保护性碱基为两尾端部分；末端加上终止密码子，所述终止密码子为TAA，下划线部分为家蝇天蚕素抗菌肽的部分成熟肽基因序列，未划线部分为蛙防御素部分成熟肽基因序列；所述抗菌肽CC的分子量、电荷数、等电点、疏水力矩分别为：3487.15，+6.5，11.49，1.02。