[发明专利]一种食品中沙门氏菌活菌的快速检测试剂盒及使用方法

摘要

本发明提供了一种食品中沙门氏菌活菌的快速检测试剂盒及使用方法，本发明对环介导等温扩增方法进行了改进，能快速检测食品中沙门氏菌活菌，与PCR检测方法相比较，PMA-LAMP检测方法提高了检测特异性、灵敏度和准确性。与传统LAMP检测方法相比较，PMA-LAMP检测方法可以区分试样中的活菌和死菌，检测结果更准确，极大降低了假阳性结果的产生，同时传统LAMP检测方法其特点是针对靶基因的6个区域设计2对特异性引物，而本发明对传统LAMP检测方法进行了创新，其特点是针对靶基因的6个区域设计3对特异性引物，使得检测特异性、灵敏度和准确性有较大的提高。

主权项

一种沙门氏菌PMA‑LAMP检测试剂盒，包括以下成分：10×反应缓冲液、Bst DNA聚合酶、10 mM dNTPs、100 mM MgSO4、40 mM PMA，1000×SYBR Green I 荧光染料和阳性对照沙门氏菌标准株；引物F3：5，CGGCCCGATTTTCTCTGC 3，；引物B3：5，CGGCAATAGCGTCACCTT 3，；引物FIP：5，GCGCGGCATCCGCATCAATATGCCCGGTAAACAGATGAGT 3，；引物BIP：5，GCGAACGGCGAAGCGTACTGTCGCACCGTCAAAGGAAC 3，；引物Loop‑F：5，GGCCTTCAAATCGGCATCAAT 3，；引物Loop‑R：5，GAAAGGGAAAGCCAGCTTTACG 3，；所述的10×反应缓冲液配方：200 mM Tris‑HCl、100 mM KCl、10 mM (NH4)2SO4、1.0% m/v Tritonx‑100。