[发明专利]一种食品中沙门氏菌活菌的快速检测试剂盒及使用方法

权利要求书

1.一种沙门氏菌PMA-LAMP检测试剂盒，包括以下成分：

10×反应缓冲液、Bst DNA聚合酶、10 mM dNTPs、100 mM MgSO₄、40 mM PMA，1000×SYBR Green I 荧光染料和阳性对照沙门氏菌标准株；

引物F3：5^，CGGCCCGATTTTCTCTGC 3^，；

引物B3：5^，CGGCAATAGCGTCACCTT 3^，；

引物FIP：5^，GCGCGGCATCCGCATCAATATGCCCGGTAAACAGATGAGT 3^，；

引物BIP：5^，GCGAACGGCGAAGCGTACTGTCGCACCGTCAAAGGAAC 3^，；

引物Loop-F：5^，GGCCTTCAAATCGGCATCAAT 3^，；

引物Loop-R：5^，GAAAGGGAAAGCCAGCTTTACG 3^，；

所述的10×反应缓冲液配方：200 mM Tris-HCl、100 mM KCl、10 mM (NH₄)₂SO₄、1.0% m/v Tritonx-100。

2.权利要求1所述沙门氏菌PMA-LAMP检测试剂盒的使用方法，其步骤是：

PMA-LAMP反应体系：在0.2 mL PCR管中依次加入10×Thermopol Reaction Buffer 2.5μL，Bst聚合酶1μL，引物FIP和BIP终浓度为1.8 μM；引物F3和B3终浓度为0.2 μM；引物LF和LB终浓度为1.0 μM，DNA模板和无RNA酶去离子水至25 μL，在60～65℃水浴中反应60 min，在85℃水浴中温浴10 min使酶失活；

引物F3：5^，CGGCCCGATTTTCTCTGC 3^，；

引物B3：5^，CGGCAATAGCGTCACCTT 3^，；

引物FIP：5^，GCGCGGCATCCGCATCAATATGCCCGGTAAACAGATGAGT 3^，；

引物BIP：5^，GCGAACGGCGAAGCGTACTGTCGCACCGTCAAAGGAAC 3^，；

引物Loop-F：5^，GGCCTTCAAATCGGCATCAAT 3^，；

引物Loop-R：5^，GAAAGGGAAAGCCAGCTTTACG 3^，；

所述的10×反应缓冲液配方：200 mM Tris-HCl、100 mM KCl、10 mM (NH₄)₂SO₄、1.0% m/v Tritonx-100。