[发明专利]多片段DNA的酵母快速组装方法

摘要

本发明公开了一种多片段DNA的酵母快速组装方法，包括以下步骤：（1）将多个含有同源臂的DNA分子与线性化的酵母穿梭载体共转化酵母；（2）将整个筛选培养板上的全部转化后的酵母菌落洗脱下来，离心，弃上清，得到转化后的酵母菌细胞；（3）提取步骤（2）获得的酵母菌细胞的质粒DNA，转化大肠杆菌感受态细胞；（4）筛选大肠杆菌克隆，得到大片段DNA。本发明的方法组装大片段DNA分子的速度快、简便可行、成功率高、成本低，效率高、易操作，可将多个小片段DNA分子组装成一个大片段DNA分子，有利于进行工业化规模扩大，用途广泛。

主权项

1.一种多片段DNA的酵母快速组装方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将多个含有同源臂的DNA分子与线性化的酵母穿梭载体pRS416或pRS413共转化酵母；(2)将整个筛选培养板上的全部转化后的酵母菌落洗脱下来，离心，弃上清，得到转化后的酵母菌细胞；(3)提取步骤(2)获得的酵母菌细胞的质粒DNA，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞；(4)通过蓝白斑筛选白色的大肠杆菌克隆，得到大片段DNA；所述多片段DNA选择如下之一：(1)K410，K411，K412，K413和K414；(2)TetR，VioA，VioB，VioC,VioD和VioE；(3)TEF1p，PDX1t‑TDH3p，MPE1t‑FBA1p，TDH2t，CrtE，CrtI和CrtYB。