[发明专利]多片段DNA的酵母快速组装方法

权利要求书

1.一种多片段DNA的酵母快速组装方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)将多个含有同源臂的DNA分子与线性化的酵母穿梭载体pRS416或pRS413共转化酵母；

(2)将整个筛选培养板上的全部转化后的酵母菌落洗脱下来，离心，弃上清，得到转化后的酵母菌细胞；

(3)提取步骤(2)获得的酵母菌细胞的质粒DNA，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞；

(4)通过蓝白斑筛选白色的大肠杆菌克隆，得到大片段DNA；

所述多片段DNA选择如下之一：

(1)K410，K411，K412，K413和K414；

(2)TetR，VioA，VioB，VioC,VioD和VioE；

(3)TEF1p，PDX1t-TDH3p，MPE1t-FBA1p，TDH2t，CrtE，CrtI和CrtYB。

2.根据权利要求1所述的一种多片段DNA的酵母快速组装方法，其特征在于所述含有同源臂的DNA分子的同源臂至少是40个碱基的特异性同源臂。

3.根据权利要求1所述的一种多片段DNA的酵母快速组装方法，其特征在于所述线性化的酵母穿梭载体是使用内切酶对酵母穿梭载体进行单酶切后获得。

4.权利要求1-3之一的一种多片段DNA的酵母快速组装方法组装的大片段DNA，所述多片段DNA选择如下之一：

(1)K410，K411，K412，K413和K414；

(2)TetR，VioA，VioB，VioC,VioD和VioE；

(3)TEF1p，PDX1t-TDH3p，MPE1t-FBA1p，TDH2t，CrtE，CrtI和CrtYB。

5.权利要求4的大片段DNA的用途，所述用途为组装合成基因组结构单元，用于生产β-胡萝卜素或紫色杆菌素。