[发明专利]一种基于腺病毒AdC7的表达载体及其构建方法

摘要

本发明涉及一种基于腺病毒AdC7的表达载体及其构建方法。本发明人设计了一种有效的策略，成功地基于黑猩猩型腺病毒AdC7构建成一种新型表达载体。所述的疫苗载体可应用于制备可高效表达且具有良好免疫原性的病毒疫苗。

主权项

1.一种制备腺病毒表达载体的方法，其特征在于，所述方法包括：以GenBank登录号AY530878.1所示的野生型腺病毒AdC7基因组为基础，删除部分E1编码区与全部E3编码区，在E1删除区增添I‑Ceu I与PI‑Sce I酶切位点，在E3删除区增添Rsr II酶切位点，获得复制缺陷型的重组腺病毒表达载体；其中，所述的删除部分E1编码区是指删除野生型AdC7基因组中第458‑3026位的序列；所述的删除全部E3编码区是指删除野生型AdC7基因组中第27094‑31799位的序列；其中，所述的方法包括：(1)将SEQ ID NO:1中第1‑1882位所示的origin序列、来源于AdC7腺病毒基因组的LITR片段、来源于AdC7腺病毒基因组的Nde I‑Age I片段通过融合PCR融合成片段OLN，用Spe I与Age I酶切片段OLN；用Nde I、Age I与Spe I酶切AdC7腺病毒基因组，将切下的片段Age‑SpeI与已酶切过的片段OLN相连接形成质粒pOIN；(2)用Hind III和Avr II酶切AdC7基因组，将切下的目的片段Hind III‑Avr II插入到质粒pOIN的Hind III和Avr II位点中，获得的质粒命名为pOINH；(3)从AdC7腺病毒基因组中扩增位于AdC7腺病毒基因中31800‑36535之间的片段，在5’端引入Avr II与Rsr II酶切位点，在3’端引入Pac I与Asis I位点，将扩增的片段插入到pOINH的Avr II与Asis I位点中，获得的质粒命名为pOINHR；和(4)从AdC7腺病毒基因组中扩增位于AdC7腺病毒基因中23165‑27093之间的片段，在3’端引入Rsr II位点，将扩增的片段插入到pOINHR的Avr II与Rsr II位点中，获得复制缺陷型的重组腺病毒表达载体。