[发明专利]针对鸡新城疫病毒、禽流感病毒和鸡传染性支气管炎病毒的三联卵黄抗体

摘要

本发明公开了一种针对鸡新城疫病毒、禽流感病毒和鸡传染性支气管炎病毒的三联卵黄抗体及其制备方法和应用。本发明提供的制备卵黄抗体的方法，包括如下步骤：（1）选取母鸡；（2）用鸡新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、禽流感病毒三联灭活苗免疫步骤（1）得到的母鸡；（3）取母鸡生产的鸡蛋并分离得到蛋黄液；（4）从步骤（3）得到的蛋黄液中分离纯化卵黄抗体。本发明对于鸡新城疫病、禽流感病和鸡传染性支气管炎的治疗和预防具有重大价值。

主权项

一种制备卵黄抗体的方法，包括如下步骤：（1）按如下原则选取母鸡：未经人工免疫；已开产且产蛋正常；经检测为新城疫病毒阴性、禽流感病毒阴性且鸡传染性支气管炎病毒阴性；（2）用鸡新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、禽流感病毒三联灭活苗免疫步骤（1）得到的母鸡；（3）完成步骤（2）后，取母鸡生产的鸡蛋并分离得到蛋黄液；（4）取步骤（3）得到的蛋黄液，与等体积蒸馏水混匀，650rpm振荡10min，然后在密封状态下65℃静置10分钟，冷却至10℃后与蒸馏水以1:4的体积比混合，调pH至5.2，4℃静置6小时，然后5000rpm离心20分钟，取上清液；（5）将等体积饱和硫酸铵水溶液加入步骤（4）得到的上清液中，4℃静置12小时，8000rpm离心20分钟，取沉淀；（6）用3质量份蒸馏水溶解1质量份步骤（5）得到的沉淀，然后加入正辛酸使其在体系中的体积比为1‰，混匀；（7）将1体积份饱和硫酸铵水溶液与2体积份步骤（6）得到溶液混匀，4℃静置12小时，8000rpm离心20分钟，取沉淀；（8）用3质量份无菌、pH7.2、0.01M的PBS缓冲液溶解1质量份步骤（7）得到的沉淀；（9）将步骤（8）得到的溶液用100Ku超滤膜包进行除盐浓缩，得到浓缩液；（10）将1体积份40%甲醛水溶液加入399体积份步骤（9）得到的浓缩液中，然后在密封状态下室温静置2小时，然后依次用0.45微米、0.22微米和0.1微米的微孔滤膜逐级过滤，得到滤液，即为卵黄抗体。