[发明专利]针对鸡新城疫病毒、禽流感病毒和鸡传染性支气管炎病毒的三联卵黄抗体

权利要求书

1.一种制备卵黄抗体的方法，包括如下步骤：

（1）按如下原则选取母鸡：未经人工免疫；已开产且产蛋正常；经检测为新城疫病毒阴性、禽流感病毒阴性且鸡传染性支气管炎病毒阴性；

（2）用鸡新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、禽流感病毒三联灭活苗免疫步骤（1）得到的母鸡；

（3）完成步骤（2）后，取母鸡生产的鸡蛋并分离得到蛋黄液；

（4）取步骤（3）得到的蛋黄液，与等体积蒸馏水混匀，650rpm振荡10min，然后在密封状态下65℃静置10分钟，冷却至10℃后与蒸馏水以1:4的体积比混合，调pH至5.2，4℃静置6小时，然后5000rpm离心20分钟，取上清液；

（5）将等体积饱和硫酸铵水溶液加入步骤（4）得到的上清液中，4℃静置12小时，8000rpm离心20分钟，取沉淀；

（6）用3质量份蒸馏水溶解1质量份步骤（5）得到的沉淀，然后加入正辛酸使其在体系中的体积比为1‰，混匀；

（7）将1体积份饱和硫酸铵水溶液与2体积份步骤（6）得到溶液混匀，4℃静置12小时，8000rpm离心20分钟，取沉淀；

（8）用3质量份无菌、pH7.2、0.01M的PBS缓冲液溶解1质量份步骤（7）得到的沉淀；

（9）将步骤（8）得到的溶液用100Ku超滤膜包进行除盐浓缩，得到浓缩液；

（10）将1体积份40%甲醛水溶液加入399体积份步骤（9）得到的浓缩液中，然后在密封状态下室温静置2小时，然后依次用0.45微米、0.22微米和0.1微米的微孔滤膜逐级过滤，得到滤液，即为卵黄抗体。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（2）中，所述免疫包括如下步骤：

基础免疫：每只鸡免疫l0个免疫剂量的所述三联灭活苗；

加强免疫：基础免疫l0天后，每只鸡免疫l0个免疫剂量的所述三联灭活苗；

强化免疫：加强免疫l0天后，每只鸡免疫20个免疫剂量的所述三联灭活苗；

维持免疫：强化免疫10天后，每只鸡免疫l0个免疫剂量的所述三联灭活苗。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步骤（3）中还包括如下步骤：选取对鸡新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、禽流感病毒的HI效价均大于1024的蛋黄液进行所述步骤（4）。

4.如权利要求1或2或3所述的方法，其特征在于：所述步骤（1）中的母鸡在雏鸡时免疫鸡干扰素α。

5.权利要求1至4中任一所述方法制备得到的卵黄抗体。

6.权利要求5所述卵黄抗体在制备预防和/或治疗鸡新城疫病、禽流感和鸡传染性支气管炎的三联疫苗中的应用。

7.一种预防和/或治疗鸡新城疫病、禽流感和鸡传染性支气管炎的三联疫苗，含有权利要求5所述卵黄抗体。