[发明专利]检测植物花器官特异性DNA甲基化修饰位点的方法及试剂盒

摘要

本发明公开了一种检测植物花器官特异性DNA甲基化修饰位点的方法及试剂盒。其中，包括以下步骤：S1，提取植物花器官基因组DNA；S2，对植物花器官基因组DNA进行酶切；S3，分别对酶切产物连接上限制性内切酶的接头；S4，以接头为模板设计的预扩增引物进行PCR预扩增，得PCR预扩增产物；S5，将PCR预扩增产物稀释后，加入带有选择性碱基的筛选引物进行PCR扩增；S6，电泳检测PCR扩增产物，统计并分析DNA条带，S7，回收、克隆S6中得到的DNA甲基化差异条带并进行测序。采用本发明提供的接头、预扩增引物和筛选引物，能够稳定、高效地检测植物花器官特异性DNA甲基化修饰位点。

主权项

一种检测植物花器官特异性DNA甲基化修饰位点的方法，其特征在于，采用MSAP技术检测DNA甲基化，包括以下步骤：S1，提取植物花器官基因组DNA；S2，分别用Msp I/EcoRI和Hpa II/EcoRI两组酶对所述植物花器官基因组DNA进行酶切；S3，分别对酶切产物连接上限制性内切酶的接头；S4，以所述接头为模板设计的预扩增引物进行PCR预扩增，得PCR预扩增产物；S5，将所述PCR预扩增产物稀释后，加入带有选择性碱基的筛选引物进行PCR扩增；S6，电泳检测PCR扩增产物，统计并分析DNA条带，S7，回收、克隆所述S6中得到的DNA甲基化差异条带并进行测序，所述接头包括EcoRI接头和HpaII/MspI接头，所述EcoRI接头的序列为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2，所述HpaII/MspI接头的序列为SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4；所述预扩增引物包括EcoRI预扩增引物和HpaII/MspI预扩增引物，所述EcoRI预扩增引物的序列为SEQ ID NO：5，所述HpaII/MspI预扩增引物的序列为SEQ ID NO：6；所述筛选引物包括EcoRI筛选引物和HpaII/MspI筛选引物，所述EcoRI筛选引物序列为SEQ IDNO：7～16，所述HpaII/MspI筛选引物序列为SEQ ID NO：17～27。