[发明专利]双重分子信标-LAMP法同时检测金黄色葡萄球菌基因和大肠杆菌基因的试剂盒及方法

摘要

本发明公开了一种双重分子信标-LAMP法同时检测金黄色葡萄球菌基因和大肠杆菌基因的试剂盒及方法，属于分子生物学检测技术领域。包括LAMP反应体系，所述LAMP反应体系中含有检测金黄色葡萄球菌基因nuc和大肠杆菌O157：H7的rfbE基因的引物组，该引物组包含nuc基因的一对外引物F3、B3，一对内引物FIP、BIP和一个分子信标探针；还包含rfbE基因的一对外引物F3、B3，一对内引物FIP、BIP和一个分子信标探针。本发明方法灵敏度高，特异性强，与对照组十几种细菌无交叉反应，操作简单，结果观察直观明了，检测速度快。

主权项

双重分子信标‑LAMP法同时检测金黄色葡萄球菌基因nuc和大肠杆菌O157:H7的rfbE基因的试剂盒，其特征在于，包括LAMP反应体系，所述LAMP反应体系中含有检测金黄色葡萄球菌基因nuc和大肠杆菌O157：H7的rfbE基因的引物组，该引物组包含nuc基因的一对外引物F3、B3，一对内引物FIP、BIP和一个分子信标探针；还包含rfbE基因的一对外引物F3、B3，一对内引物FIP、BIP和一个分子信标探针；其中，所述的nuc基因的引物组为：外引物F3的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示；外引物B3的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.2所示；内引物FIP的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.3所示；内引物BIP的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.4所示；分子信标探针的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.5所示；所述的rfbE基因的引物组为：外引物F3的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.6所示；外引物B3的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.7所示；内引物FIP的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.8所示；内引物BIP的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.9所示；分子信标探针的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.10所示；所述的LAMP反应体系的总体积为25μl，包括以下组分：1）2μl的待测样品模板DNA；2）nuc基因和rfbE基因的外引物F3、B3各0.4μM/L，内引物FIP、BIP各2.4μM/L，rfbE基因的外引物F3、B3各0.4μM/L，内引物FIP、BIP各2.4μM/L；3）DNA聚合酶：每μl含8个活性单位的Bst DNA聚合酶；4）2.8mmol/l的dNTP，0.8mol/l的甜菜碱，2μl的Buffer，2μl的ddH2O。