[发明专利]一种红色荧光钙离子探针的制备方法及其应用

摘要

一种红色荧光钙离子探针的制备方法及其应用。本发明以红色荧光的荧光素类似物或其衍生物为荧光报告基团、以1,2-双（2-氨基苯氧基）-乙烷-N,N,N’,N’-四乙酸（BAPETA）或其衍生物为钙离子螯合基团，通过二者共价键合，得到红色荧光钙离子探针；在缓冲溶液中，该探针荧光强度随钙离子浓度增加而增大；在几种哺乳细胞内，该探针的荧光强度随钙离子浓度波动而变化。本探针基于荧光素类似物或其衍生物的红色荧光特性与BAPETA或其衍生物的钙离子结合能力，能穿透细胞膜、并能特异性识别钙离子。本发明方法反应条件简单，操作方便，得到的探针可以用于实时监测动物细胞胞浆内游离钙离子浓度。

主权项

一种能够对动物细胞胞浆内钙离子实时荧光检测的红色荧光钙离子探针的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1) 在容有3~25 mL DMF的反应容器内，按摩尔比1:1.2~1:1.4加入多肽偶联剂2‑(7‑氮杂‑1H‑苯并三氮唑‑1‑基)‑1,1,3,3‑四甲基脲六氟磷酸酯（HATU）0.2~2.2 mmol和1‑羟基苯并三唑(HOBt) 0.24~3.1 mmol，再按摩尔比1.5:1 ~ 1:5加入具有红色荧光的荧光素类似物或其衍生物0.02~0.2 mmol与1,2‑双（2‑氨基苯氧基）‑乙烷‑N,N,N’,N’‑四乙酸（BAPETA）或其衍生物0.013~1.0 mmol，氩气保护下磁力搅拌过夜；(2) 向步骤(1)所得溶液中加入2~10 mL 0.5~1 M盐酸后，以二氯甲烷提取产物，有机相用盐水洗涤、Na2SO4干燥、挥发溶剂至完全干燥，再向所得固体加入1~5 mL 1 M氢氧化钠和2~10 mL甲醇，室温搅拌2~5小时后以1 M盐酸中和；(3) 以柱色谱提纯，制得红色荧光的荧光素类似物或其衍生物与BAPETA或其衍生物的共价结合物，即本发明所设计的红色荧光钙离子探针。