[发明专利]利用细菌人工染色体同源重组提高细胞转染效率的方法有效
| 申请号： | 201310228852.1 | 申请日： | 2013-06-07 |
| 公开（公告）号： | CN103352050A | 公开（公告）日： | 2013-10-16 |
| 发明（设计）人： | 曹忠洋;阮卫民;郑合勋 | 申请（专利权）人： | 曹更生 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/63 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王朋飞 |
| 地址： | 475004 河南省*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种利用细菌人工染色体同源重组提高细胞转染效率的方法。利用pABRG重组质粒对含有目的基因的BAC进行同源重组，然后采用经哺乳动物密码子优化过的Tol2转座子将重组后的BAC通过核转染技术转染宿主细胞，使重组后的含有目的基因的BAC整合到宿主细胞的基因组中。通过成功构建含有人类UBC启动子的eGFP标记基因和真核筛选抗性neo基因的BAC载体，并且载体两端有Loxp元件，为转染细胞后的标记和抗性去除做准备。此外，电转染BAC-Tol2-eGFP载体，转染效率达到了1%-6%，最高可到达10%，为大型哺乳动物BAC的使用和操作提供了一套完整的实验路线和方法。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 细菌 人工 染色体 同源 重组 提高 细胞 转染 效率 方法 | ||
【主权项】：
一种利用细菌人工染色体同源重组提高细胞转染效率的方法，其特征在于，利用pABRG重组质粒对含有目的基因的BAC进行同源重组，然后采用经哺乳动物密码子优化过的Tol2转座子将重组后的BAC通过核转染技术转染宿主细胞，使重组后的含有目的基因的BAC整合到宿主细胞的基因组中。
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